大規模ゼブラフィッシュベース in vivoで小分子スクリーン
1Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine,Vanderbilt University School of Medicine, 2Department of Pharmacology,Vanderbilt University School of Medicine, 3Vanderbilt Institute of Chemical Biology,Vanderbilt University School of Medicine, 4Research Medicine, Veterans Affairs TVHS,Vanderbilt University School of Medicine
Summary
ゼブラフィッシュは、強力なとして浮上している<em> in vivoで</em表現ベースの薬剤の画面と化学遺伝学的解析のための>プラットフォーム。ここで、我々は、ゼブラフィッシュ胚を用いた小分子の大規模スクリーニングのためのシンプルで実用的な方法を示しています。
Abstract
彼らの小さな胚の大きさ、急速な発展、透明性、繁殖力、そして哺乳類に多数の分子、形態学的および生理学的類似性を考えると、ゼブラフィッシュは、強力なとして浮上している<em> in vivoで</em表現ベースの薬剤の画面と化学遺伝学的解析のための>プラットフォーム。ここで、我々は、ゼブラフィッシュ胚を用いた小分子の大規模スクリーニングのためのシンプルで実用的な方法を示しています。
Protocol
1）ゼブラフィッシュの卵コレクション前化学画面の日に午後に、10〜20ゼブラフィッシュの繁殖タンクを設置。水産養殖システムから水を各タンクを埋める。魚のネットを使用して、それぞれの繁殖水槽の内側の容器に大人一人の男性と一から二成人女性を転送する。分圧器を使用して、お互いからオスとメスの魚を区切ります。ケージにラベルを付け、それらの上に蓋をする。 …
Discussion
ゼブラフィッシュベースの化学スクリーンを計画する場合は、特に注意が検討中の表現型とそのような表現型のバックグラウンドレートの堅牢性に注意する必要があります。これは、誘導表現型の化学的抑制のためのスクリーンのために特に重要です。例えば、導入遺伝子の熱ショック誘導による表現型のため、表現型を誘導する条件は、再現性良く正確に容認できないほど高い偽陽性率を?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
- Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
- Petri dishes (10 cm).
- Plastic tea strainer.
- Wash bottle containg embryo water.
- Disposable polyethylene transfer pipettes.
- Polystyrene 96-well round-bottom assay plates (Corning COSTAR; Lowell, MA).
- Glass Pasteur pipette (Fisher Scientific).
- Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
- E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
- 12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
- 12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
- Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
- Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
- Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
- DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
- Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
- Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).
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Cite This Article
Hao, J., Williams, C. H., Webb, M. E., Hong, C. C. Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (46), e2243, doi:10.3791/2243 (2010).