96 Ну планшет метода, основанного на формировании мониторинга и тестирования Противогрибковые Восприимчивость Candida Albicans Биопленки
Summary
Мы опишем простой, быстрый и надежный метод для формирования<em> Candida Albicans</em> Биопленки использованием 96-луночных микротитровальных и его полезность в противогрибковые тестирования чувствительности клеток внутри биопленки.
Abstract
Candida Albicans остается наиболее частой причиной грибковых инфекций у растущего населения зараженных пациентов и кандидоза в настоящее время третьей наиболее распространенной инфекцией в больницах США. Различные проявления кандидоза, связанные с формирование биопленок, как на ткани хозяина и / или медицинские приборы (например, катетеры). Формирование биопленок несет отрицательную клинических проявлений, как клетки в биопленки защищены от иммунного ответа и от действия противогрибковых средств. Мы разработали простой, быстрый и надежный в пробирке модель образования С. Albicans биопленки использованием 96-луночных микротитровальных пластин, которые также могут быть использованы для биопленки противогрибковые тестирования восприимчивости. Считывания данного анализа колориметрическим, основанная на сокращении XTT (тетразолия соли) метаболически активными грибковых клеток биопленки. Типичный эксперимент занимает около 24 ч для образования биопленки, с дополнительными 24 ч для тестирования чувствительности к противогрибковым. Из-за своей простоты и использование обычно доступных лабораторных материалов и оборудования, этот метод демократизирует биопленки исследований и представляет собой важный шаг на пути к стандартизации тестирования чувствительности к противогрибковым грибковых биопленки.
Protocol
Discussion
Здесь мы опишем простой, быстрый, экономичный и очень воспроизводимые модели с 96 планшет для формирования биопленок Candida в сочетании с колориметрическим методом, что меры, метаболической активности клеток внутри биопленки использованием XTT. Это 96-модель планшет для биопленки перв…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Биопленка связанных работать в лаборатории финансируется за счет грантов и пронумерованы R21DE017294 R21AI080930 из Национального института стоматологических и черепно-лицевых исследований и Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний (в JLL-R.). Содержание несут их авторы и не обязательно отражает официальную точку зрения NIDCR, NIAID или НИЗ.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sabouraud-dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates | |
| YPD: Yeast peptone dextrose | US Biological | Y2076 | Medium for propagation of overnight liquid cultures | |
| RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | Liquid medium for biofilm formation | |
| Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) | Fisher | BP308 | To buffer RPMI 1640 | |
| Phosphate buffered saline, PBS | Sigma | P4417 | Buffer for washes | |
| XTT sodium salt | Sigma | X4251 | See above for preparation instructions | |
| Ringer’s lactate | Hospira | NDC0409-7953-09 | For preparation of XTT solution | |
| Menadione | Sigma | M5625 | Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion | |
| Petri dishes | Fisher | 08-757-12 | ||
| 15 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430790 | ||
| 50 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
| 96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated | Corning | 3595 | ||
| Multichannel pipette and tips | Eppendorf | |||
| Incubator | Any | |||
| Microtiter plate reader | Any |
References
- Bachmann, S. P. In vitro activity of caspofungin against Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 46, 3591-3596 (2002).
- Hawser, S. P., Norris, H., Jessup, C. J., Ghannoum, M. A. Comparison of a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-t etrazolium hydroxide (XTT) colorimetric method with the standardized National Committee for Clinical Laboratory Standards method of testing clinical yeast isolates for susceptibility to antifungal agents. J Clin Microbiol. 36, 1450-1452 (1998).
- Kuhn, D. M., Balkis, M., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. Uses and limitations of the XTT assay in studies of Candida growth and metabolism. J Clin Microbiol. 41, 506-508 (2003).
- Kuhn, D. M., George, T., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. Antifungal susceptibility of Candida biofilms: Unique efficacy of amphotericin B lipid formulations and echinocandins. Antimicrob. Agents Chemother. 46, 1773-1780 (2002).
- Nobile, C. J., Mitchell, A. P. C. albicans transcription factor Bcr1p: a regulator of cell-surface genes and biofilm formation. Current Biol. 15, 1150-1155 (2005).
- Ramage, G., Saville, S. P., Thomas, D. P., Lopez-Ribot, J. L. Candida biofilms: an update. Eukaryot Cell. 4, 633-638 (2005).
- Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., p, B. L., Lopez-Ribot, J. L. Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).
- Bachmann, S. P. Antifungal combinations against Candida albicans biofilms in vitro. Antimicrob Agents Chemother. 47, 3657-3659 (2003).
- Ramage, G., VandeWalle, K., Bachmann, S. P., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. In vitro pharmacodynamic properties of three antifungal agents against preformed Candida albicans biofilms determined by time-kill studies. Antimicrob Agents Chemother. 46, 3634-3636 (2002).
- Ramage, G., VandeWalle, K., Wickes, B. L., López-Ribot, J. L. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans. Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).
- Tellier, R., Krajden, M., Grigoriew, G. A., Campbell, I. Innovative endpoint determination system for antifungal susceptibility testing of yeasts. Antimicrob Agents Chemother. 36, 1619-1625 (1992).
- Nett, J., Andes, D. Candida albicans biofilm development, modeling a host-pathogen interaction. Curr Opin Microbiol. 9, 340-345 (2006).
