Amaxa Nucleofector İnsan Sinir Kök Hücreler Transfecting
Summary
Bir ilgi bir hücreye gen Tanıtımı in vivo fonksiyonu nedenlerine açıklık için güçlü bir yöntemdir. Bu protokol Amaxa tarafından yapılan Nucleofector elektroporasyon cihazları kullanırken insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) bir kültür transfecting verimli bir yöntem açıklanır.
Abstract
Yaygın olarak kullanılan katyonik lipid transfeksiyon ayıraçları ile insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) gibi birincil memeli sinir hücreleri, Transfeksiyon genellikle kötü hücre canlılığı ve düşük transfeksiyon verimliliği sonuçlandı. Böyle bir gen tabancası veya mikroenjeksiyon gibi ilgi bir gen, tanıtan diğer mekanik yöntemler de kötü hücre canlılığı ve transfekte hücreleri düşük numaraları ile sınırlıdır. Birincil hücre içine dışsal bir gen tanıtmak için viral yapıları kullanarak strateji viral vektörler ve potansiyel güvenlik endişeleri oluşturmak için gerekli zaman ve emek miktarı hem de kısıtlı olmuştur. Biz burada, nöral kök hücreler transfecting için özel olarak optimize edilmiş elektrik akımı parametreleri ve tampon çözeltiler Amaxa Nucleofector cihaz ve teknoloji kullanarak hNSPCs transfecting için bir adım-adım protokolünü açıklar. Bu protokolü kullanarak, biz, yaklaşık% 35 ilk transfeksiyon verimlilik elde etti ve istikrarlı bir transfeksiyon sonra% 70 ~. Protokol Nucleofector cihaz ile elektroporasyon uygun tampon transfekte DNA ile hNSPCs yüksek sayıda birleştirerek gerektirir.
Protocol
Discussion
Bu protokol hNSPCs için oldukça hızlı ve verimli bir transfeksiyon prosedürü açıklamaktadır. Bu yordamı kullanarak, biz, yaklaşık% 35 ilk transfeksiyon verimlilik elde edilmiştir. Bu yordamı transfekte Hücreler bir seçim aracı stably transfekte nüfus üretmek için kullanılır ise kısa vadeli çalışmalar için (geçici olarak transfekte hücreler) ya da uzun vadeli çalışmalar için kullanılabilir. Biz eksojen protein ifade hücrelerin% 70 ~ hangi stabil transfekte hücreleri oluşturulur. Geçici transfekte hNSPCs,…
Acknowledgements
Yazarlar, Çocuk Hastanesi, Orange County hNSPC kültürleri Araştırma Enstitüsü Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynak Dr. Philip H. Schwartz kabul etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| The Nucleofector Device | Tool | Amaxa | AAD-1001 | |
| Mouse neural stem cell nucleofector kit | Reagent | Amaxa | VPG-1004 |
References
- Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. New non-viral method for gene transfer into primary cells. Methods. 33, 151-163 (2004).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Counting Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
