Transfecting אדם בתאי גזע עצביים עם Nucleofector Amaxa
Summary
היכרות עם גן עניין לתא היא שיטה חזקה הבהרת תפקידה in vivo. פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה transfecting תרבות של גזע אנושי / מבשר תאים עצביים (hNSPCs) באמצעות מנגנון electroporation Nucleofector שנעשו על ידי Amaxa.
Abstract
Transfection העיקרי של תאים עצביים יונקים, כגון גזע אנושי / מבשר תאים עצביים (hNSPCs), עם נפוץ ריאגנטים transfection קטיוני שומנים הביא לעתים קרובות כדאיות התא עניים transfection יעילות נמוכה. שיטות מכאניות אחרות של החדרת גן של עניין, כגון אקדח או גן microinjection, מוגבלים גם על ידי כדאיות התא עניים המספרים הנמוכים של תאים transfected. האסטרטגיה של שימוש בונה ויראלי להציג הגן אקסוגניים לתוך תאים ראשוניים כבר מוגבל על ידי כמות הן של זמן העבודה הנדרש כדי ליצור וקטורים נגיפיים חששות בטיחות פוטנציאליים. אנו מתארים כאן פרוטוקול צעד אחר צעד עבור transfecting hNSPCs השימוש במכשיר Nucleofector של Amaxa וטכנולוגיה עם פרמטרים זרם חשמלי ופתרונות המאגר מותאם במיוחד עבור transfecting בתאי גזע עצביים. שימוש בפרוטוקול זה, השגנו יעילות transfection הראשונית של 35% ו ~ ~ 70% לאחר transfection יציבה. הפרוטוקול מחייב שילוב של מספר גבוה של hNSPCs עם ה-DNA להיות transfected במאגר המתאים ואחריו electroporation עם המכשיר Nucleofector.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה מתאר הליך transfection מהיר יחסית ויעיל hNSPCs. באמצעות הליך זה, השגנו יעילות transfection הראשונית של 35% ~. תאים transfected על ידי הליך זה יכול לשמש מחקרים קצרי טווח (תאים transfected transiently) או לטווח ארוך מחקרים אם סוכן מבחר משמש ליצירת אוכלוסיה transfected ביציבות. יש לנו שנוצר בתאי transfected ביציבות …
Acknowledgements
המחברים רוצים להכיר ד"ר פיליפ שוורץ ח של המשאבים הלאומיים האדם עצבית לתאי גזע בבית החולים לילדים, אורנג' קאונטי מכון המחקר למתן תרבויות hNSPC.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| The Nucleofector Device | Tool | Amaxa | AAD-1001 | |
| Mouse neural stem cell nucleofector kit | Reagent | Amaxa | VPG-1004 |
References
- Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. New non-viral method for gene transfer into primary cells. Methods. 33, 151-163 (2004).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Counting Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
