זמן לשגות הדמיה חיה של Related Clonally ובתאים עצבית של פיתוח דג הזברה forebrain
Summary
הסרטון הנוכחי מדגים שיטה אשר מנצל שילוב של electroporation ו מיקרוסקופיה confocal לבצע הדמיה לחיות על הפרט ובתאים עצבית forebrain דג הזברה מתפתח.<em> ב-vivo</em> ניתוח של התפתחות של תאים עצביים forebrain אבי ברמה המשובטים יכולה להיות מושגת בדרך זו.
Abstract
דפוסים מדויקים של הגירה החלוקה, ואת הבידול של ובתאים עצביים חיוניים להתפתחות המוח תקין 1,2 לתפקד. כדי להבין את ההתנהגות של ובתאים עצביים במתחם בסביבה vivo, זמן לשגות הדמיה חיה של ובתאים עצביים במוח שלם נדרש אנושות. בסרטון זה, אנו מנצלים את התכונות הייחודיות של עוברי דג הזברה כדי לחזות את התפתחותם של תאים עצביים forebrain אבי in vivo. אנו משתמשים כדי electroporation גנטית בדלילות הפרט תווית תאים עצביים אבי. בקצרה, בונה DNA המקודד סמנים ניאון הוזרקו החדר forebrain של 22 שעות שלאחר ההפריה (hpf) עוברי דג הזברה פולסים חשמליים נמסרו מיד. שש שעות מאוחר יותר, עוברי דג הזברה electroporated היו רכוב עם נקודת התכה נמוכה agarose בתרבות צלחות זכוכית התחתונה. שכותרתו fluorescently ובתאים עצביים הם צילמו אז עבור 36hours עם במרווחי זמן קבועים תחת מיקרוסקופ confocal באמצעות טבילה במים העדשה אובייקטיבי. השיטה הנוכחית מספק דרך להשיג תובנות בפיתוח vivo של תאים ובתאים forebrain עצביים יכול להיות מיושם על חלקים אחרים של מערכת העצבים המרכזית של העובר דג הזברה.
Protocol
Discussion
בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את שיטת הדמיה זמן לשגות חיים של ובתאים עצביים ברמה המשובטים בקידמתו דג הזברה מתפתח. בדקנו ולשנות את הפרוטוקולים הקיימים electroporation 4-6 כדי גנטית fluorescently בודדים תווית תאים עצביים אבי. עץ היוחסין מורכב clonally התאים הצאצאים הקשורים ניתן לקבוע ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי theNIH grantNS042626. אנו מודים קוץ קורט קליפורניה בסן פרנסיסקו ניקון הדמיה מרכז סיוע הדמיה.
References
- Temple, S. The development of neural stem cells. Nature. 414, 112-117 (2001).
- G#246;tz, M., Huttner, W. B. The cell biology of neurogenesis. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).
- Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos. Methods. 39, 207-211 (2006).
- Hendricks, M., Jesuthasan, S. Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development. Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).
- Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae. Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).
- Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration. Genesis. 32, 27-31 (2002).
