समय चूक विकास Zebrafish अग्रमस्तिष्क में Clonally संबंधित तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की लाइव इमेजिंग
Summary
वर्तमान वीडियो एक विधि है जो electroporation और confocal माइक्रोस्कोपी के संयोजन का लाभ लेता है है विकासशील zebrafish अग्रमस्तिष्क में व्यक्तिगत तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं पर रहते इमेजिंग प्रदर्शन को दर्शाता है.<em> Vivo में</em> अग्रमस्तिष्क एक clonal स्तर पर तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के विकास के विश्लेषण के इस तरह से हासिल किया जा सकता है.
Abstract
विभाजन, प्रवास, और तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की भेदभाव की सटीक पैटर्न उचित मस्तिष्क विकास और समारोह 1,2 के लिए महत्वपूर्ण हैं. Vivo वातावरण में परिसर में न्यूरल पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के व्यवहार को समझने के लिए, समय चूक एक अक्षुण्ण मस्तिष्क में तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का जीना इमेजिंग समीक्षकों की आवश्यकता है. इस वीडियो में, हम zebrafish भ्रूण की अनूठी विशेषताओं का दोहन करने के लिए vivo में अग्रमस्तिष्क तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के विकास की कल्पना. हम आनुवंशिक और कम से लेबल व्यक्तिगत तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं को electroporation का उपयोग करें. संक्षेप में, डीएनए फ्लोरोसेंट मार्करों के लिए कोडिंग constructs 22 घंटे के बाद निषेचन (HPF) zebrafish भ्रूण और बिजली के दालों तुरंत दिया गया अग्रमस्तिष्क निलय में इंजेक्शन थे. छह घंटे बाद, electroporated zebrafish भ्रूण कम पिघलने बिंदु agarose साथ गिलास नीचे संस्कृति बर्तन में घुड़सवार थे. Fluorescently लेबल तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं तो एक confocal खुर्दबीन के नीचे पानी की सूई उद्देश्य लेंस का उपयोग निर्धारित अंतराल के साथ 36hours के लिए imaged थे. वर्तमान विधि अग्रमस्तिष्क तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के vivo विकास में में अंतर्दृष्टि लाभ प्रदान करता है और zebrafish भ्रूण के केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के अन्य भागों में लागू किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
इस वीडियो में, हम समय चूक विकासशील zebrafish अग्रमस्तिष्क में एक clonal स्तर पर तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का जीना इमेजिंग के लिए एक विधि का प्रदर्शन. हम परीक्षण और आनुवंशिक और fluorescently लेबल व्यक्तिगत तंत्रिक?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम theNIH grantNS042626 द्वारा समर्थित किया गया. हम कर्ट कांटा और UCSF Nikon इमेजिंग केंद्र इमेजिंग के साथ सहायता के लिए धन्यवाद.
References
- Temple, S. The development of neural stem cells. Nature. 414, 112-117 (2001).
- G#246;tz, M., Huttner, W. B. The cell biology of neurogenesis. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).
- Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos. Methods. 39, 207-211 (2006).
- Hendricks, M., Jesuthasan, S. Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development. Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).
- Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae. Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).
- Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration. Genesis. 32, 27-31 (2002).
