इस रिपोर्ट में, हम एक अलग करने के लिए प्रणाली और संस्कृति माउस स्तन ग्रंथि से दाता कोशिकाओं का प्रदर्शन, और orthotopically stromal विश्लेषण: स्तन ट्यूमर के विकास के दौरान उपकला बातचीत प्राप्तकर्ता चूहों में इन कोशिकाओं का प्रत्यारोपण.
माउस मॉडल के उपयोग के माध्यम से स्तन ट्यूमर प्रगति पर fibroblasts सहित stromal कोशिकाओं के प्रभाव को अच्छी तरह से किया गया है stromal कोशिकाओं और चूहों की स्तन ग्रंथि में उपकला कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के माध्यम से विशेष रूप से, प्रलेखित. वर्तमान प्रत्यारोपण मॉडल अक्सर immunocompromised stromal कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं के अलग आनुवंशिक पृष्ठभूमि के कारण चूहों के उपयोग शामिल है. कोशिकी matrices अक्सर संगत सेल सेल बातचीत के लिए दो अलग अलग सेल प्रकार एम्बेड करते हैं, लेकिन Matrigel या चूहे की पूंछ कोलेजन, जो immunogenic substrates के इस्तेमाल को शामिल किया जाता है. immunocompromised चूहों से कार्यात्मक टी कोशिकाओं की कमी दवा के विकास और प्रभावकारिता पर महत्वपूर्ण प्रभाव के साथ vivo में स्तन ट्यूमर प्रगति पर stromal कोशिकाओं के सटीक आकलन, रोकता है . इसके अलावा, immunocompromised चूहों महंगा, नस्ल और विशेष देखभाल की स्थिति की आवश्यकता मुश्किल हैं. इन बाधाओं पर काबू पाने के लिए, हम एक दृष्टिकोण के लिए orthotopically चूहों में एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि से stromal सेल और उपकला कोशिकाओं को लगातार ट्यूमर गठन को प्रेरित प्रत्यारोपण विकसित किया है. इस प्रणाली दाता C57BL/6J चूहों से सामान्य, कार्सिनोमा जुड़े fibroblasts, PyVmT स्तन कार्सिनोमा कोशिकाओं और कोलेजन कटाई शामिल है. कोशिकाओं तो कोलेजन में एम्बेडेड रहे हैं और वंक्षण महिला C57BL/6J चूहों की स्तन ग्रंथियों में प्रतिरोपित. अकेले PyVmT कोशिकाओं के प्रत्यारोपण स्पर्शनीय ट्यूमर 30-40 दिनों के बाद प्रत्यारोपण के रूप में. 60 दिनों में समापन बिंदु विश्लेषण दर्शाता है कि fibroblasts के साथ सह – प्रत्यारोपण PyVmT अकेले प्रतिरोपित कोशिकाओं की तुलना में स्तन ट्यूमर के विकास को बढ़ाता है. जबकि C57BL/6J चूहों से कोशिकाओं और मैट्रिक्स इन अध्ययनों में इस्तेमाल किया गया, कोशिकाओं और मैट्रिक्स और प्रत्यारोपण दृष्टिकोण के अलगाव अलग आनुवंशिक बहुमुखी प्रतिभा का प्रदर्शन पृष्ठभूमि से चूहों की दिशा में लागू किया जा सकता है. संक्षेप में, इस प्रणाली stromal कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं के बीच आणविक मुलाकातों की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और immunocompromised माउस मॉडल में महत्वपूर्ण सीमाओं पर काबू.
ट्यूमर प्रगति में fibroblasts के कार्यात्मक योगदान प्रत्यारोपण मॉडल के माध्यम से प्रदर्शित किया गया है, जिसमें कार्सिनोमा जुड़े fibroblasts सौम्य स्तन वृद्धि ट्यूमर के विकास और 5 invasiveness में उपकला कोशिकाओं परिणा?…
The authors have nothing to disclose.
इस परियोजना के माध्यम से NIH / NCI अनुदान R00 संख्या CA127357 और कान्सास कैंसर सेंटर बंदोबस्ती के विश्वविद्यालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
DMEM | VWR | 10000113873 | |
Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
DAPI | Invitrogen | D21490 | |
Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
# 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
betadine | fisher | NC9386574 | |
Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
Wound staple | Fisher | 12031-07 |