Mammary Transplantation von Stromazellen und Carcinoma Cells in C57BL/6J-Mäuse
Summary
In diesem Bericht zeigen wir ein System zur Isolierung und Kultur Spenderzellen von der Maus Brustdrüse und orthotop Transplantation dieser Zellen in Empfängermäuse zu Stromatumoren analysieren: epitheliale Interaktionen während Mammatumor Entwicklung.
Abstract
Der Einfluss der Stroma-Zellen, einschließlich Fibroblasten auf Mamma-Tumorprogression wurde auch durch den Einsatz von Maus-Modellen dokumentiert, insbesondere durch die Transplantation von Stromazellen und Epithelzellen in der Brustdrüse von Mäusen. Aktuelle Transplantation Modelle oft mit dem Einsatz von immungeschwächten Mäusen aufgrund der unterschiedlichen genetischen Hintergründen von Stromazellen und Epithelzellen. Extrazelluläre Matrices werden oft verwendet, um die zwei verschiedenen Zelltypen für die konsequente Zell-Zell-Interaktionen eingebettet, sondern mit dem Einsatz von Matrigel oder Rattenschwanz Collagen, die immunogene Substrate sind. Das Fehlen von funktionellen T-Zellen aus Mäusen Immunsystem verhindert eine genaue Berechnung der Stromazellen auf Mamma Tumorprogression in vivo, mit wichtigen Auswirkungen auf die Entwicklung von Medikamenten und Wirksamkeit. Darüber hinaus sind immungeschwächte Mäuse teuer, schwer zu züchten und bedürfen einer besonderen Pflege Bedingungen. Um diese Hindernisse zu überwinden, haben wir einen Ansatz zur orthotop transplantierten Stromazellen und Epithelzellen in Mäuse aus dem gleichen genetischen Hintergrund, um konsistente Tumorbildung induzieren entwickelt. Dieses System beinhaltet die Ernte normal, Karzinom assoziiert Fibroblasten, PyVmT Mammakarzinom-Zellen und Kollagen vom Spender C57BL/6J-Mäuse. Die Zellen werden dann in Kollagen eingebettet und transplantiert in der Leistengegend Milchdrüsen der weiblichen C57BL/6J-Mäuse. Die Transplantation von Zellen allein PyVmT Form tastbaren Tumoren 30-40 Tage nach der Transplantation. Endpoint-Analyse nach 60 Tagen zeigt, dass Ko-Transplantation mit Fibroblasten erhöht Brusttumor Wachstum im Vergleich zu PyVmT Zellen transplantiert allein. Während Zellen und Matrix aus C57BL/6J-Mäuse in diesen Studien verwendet wurden, kann die Isolierung von Zellen und Matrix und Transplantation Ansatz Mäuse aus verschiedenen genetischen Hintergründen demonstriert Vielseitigkeit angewendet werden. Zusammenfassend kann dieses System verwendet, um molekulare Wechselwirkungen zwischen Stromazellen und Epithelzellen zu untersuchen, und überwindet kritische Einschränkungen bei immungeschwächten Mausmodellen.
Protocol
Discussion
Die funktionalen Beitrag von Fibroblasten in der Tumorprogression ist durch die Transplantation Modellen nachgewiesen, in denen Karzinome assoziiert Fibroblasten mit gutartigen Brustepithelzellen führt zu einem erhöhten Tumorwachstum und Invasivität 5 Co-transplantiert. Herkömmliche Ansätze der Transplantation haben die Verwendung von SCID oder Nacktmäusen, die Zusammenarbeit der Transplantation stromalen und epithelialen Zellen aus unterschiedlichen genetischen Hintergründen Maus oder verschiedene Art…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dieses Projekt wurde durch von NIH / NCI Grantnummer R00 CA127357 und der University of Kansas Cancer Center Endowment finanziert.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
| MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
| Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
| DMEM | VWR | 10000113873 | |
| Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
| amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
| Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
| Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
| Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
| 10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
| Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
| Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
| Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
| Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
| hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
| DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
| Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
| Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
| Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
| Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
| CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
| CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
| DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
| Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
| Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
| Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
| Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
| DAPI | Invitrogen | D21490 | |
| Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
| Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
| Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| # 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
| Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
| Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
| betadine | fisher | NC9386574 | |
| Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
| Wound staple | Fisher | 12031-07 |
References
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