Summary
내피 활성화 및 일부 혈액 스테이시, Virchow의 깡패의 두 가지 구성 요소로 인해 정맥 혈전 형성 유형의 하부 대정 맥 결과의 내부 표면에 내피 활성화 전해 유도.
Abstract
동물 모델은 혈전 형성, 혈전 해상도를 공부하고 잠재적인 치료 화합물 (1) 테스트하기 위해 깊은 정맥 혈전증 (DVT) 연구에 중요한 역할을 제공하고 있습니다. DVT의 치료 및 예방에 활용하는 새로운 화합물은 현재 개발되고있다. 영향을 thrombosed 정맥에 잠재적인 치료 길항제 화합물의 배달 문제가되었습니다. 에서 치료 응용 프로그램의 컨텍스트 부분 스테이시 스를 사용하고 지속적으로 주요 정맥 내에 thrombi를 생성하는 모델은 최근에 설립되었습니다. 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)는 지속적인 혈류의 존재에 혈전 형성을 허용 DVT의 마우스 모델입니다. 이 모델은 치료 요원들이 역동적인 방식으로 혈전 접촉에있을 수 있으며, DVT (1)의 다른 모델보다 더 민감합니다. 또한,이 혈전증 모델은 밀접하게 혈전 형성의 임상 상황을 시뮬레이션하고 정맥 내피 세포 활성화, 백혈구 마이 그 레이션, 정맥 thrombogenesis을 연구하고 치료 응용 프로그램 (1) 테스트 이상적입니다. EIM 모델은, 쉽게 재현할 수, 기술적으로 간단 일관 thrombi 크기를 생성 및 분석을 위해 필요한 큰 예제 (예 : 혈전과 정맥 벽)에 있습니다.
Protocol
1. 마우스 아나스타샤 절차
- 동물들은 케이지에서 제거하고 2% isoflurane과 분당 0.5 리터 (기화기 제어)의 유량 100 % 산소로 가스 유도를위한 마취 미리 수술 유도 챔버에 배치됩니다.
- 생쥐는 마취 유도 챔버에서 진정 챔버에서 제거하고 머리 depilatory가 (1 분) 사용되는 경우 복부 복부는 전기 면도기로 면도, 또는 챔버 내에 유지집니다.
- 아직 진정제를 맞았 는데도, 그들은 무게가 있지만, 내 눈을 그 다음 isoflurane과 산소를 사용하여 코 콘로 전신 마취하에 온수 순환 난방 장치 등의 recumbancy에 위치 살균 안과 연고와 함께 윤활 있습니다. 이 시점에서 산소 요금은 분당 0.2 리터로 축소됩니다.
- 복부는 chlorhexidine 솔루션을 뿌려놓은 (chlorhexidine의 디아 세 테이트 빠르게 bacterialcidal 및 영구이다) 및 멸균 거즈로 세 번 닦아 또는 외과 사이트 깨끗한까지입니다.
2. 마우스 미세 수술 및 복구 절차
- 복부 정중선 절개 (2cm)은 복부를 노출 피부와 복벽을 통해 홍채 가위로 이루어집니다. 거즈의 멸균 생리 젖었 2x2은 동물의 왼쪽에 장내를 반영하는 데 사용됩니다. 마우스 restrainer는 하부 대정 맥 (IVC)의 장소 있도록 시각화에 들어가게된다.
- 이 시점에서, isoflurane 2 %의 유지 보수 수준으로 감소되고 산소 비율이 수술의 나머지를 위해 분당 0.2 리터에 남아 있습니다.
- 무딘 절개는 살균 작은 주걱의 면봉과 별도의 섬세한 홍채 절반 곡선 조직 집게를 사용하여 용이합니다. 관리들은 매우되기 위해 마우스 조직 처리로 촬영해야합니다.
- 신장 혈관에서 장골의의 분기점 모든 IVC 사이드 지점은, 7-0 반응 prolene의 봉합과 함께 출혈도 잡았 있습니다. 백 가지 특허 있었다.
- 은색 코팅 동선 (KY - 30 - 1 - GRN, Electrospec, 도버, NJ)에 연결된 전해 IVC 모델 (EIM), 25G 스테인리스 바늘에 노출된 꼬리 IVC (그림 1)에 삽입 그리고 앞의 벽 (양극)에 대한 위치.
- 또 다른 와이어는 subcutaneously 회로 (음극)을 완료 이식입니다.
- 십오분 이상 250 μAmps의 전류는 그라스 S48 스퀘어 웨이브 자극기와 정전류 장치를 (그라스 기술, 아스트로 - 메드 (주), 웨스트 워릭, RI)를 사용하여 적용되었다. thrombogenic 환경과 이후의 혈전 형성을 촉진 IVC의 내피 표면을 침식 전기의 독성 제품의 형성에 직류 결과.
- 십오분 후 주사 바늘을 제거하고 면봉은 출혈을 방지하기 위해 지역과 접촉 부드럽게 열립니다
- 가짜 동물에 주사 바늘을 현재의 응용 프로그램없이 IVC에 배치 후 제거됩니다.
- 개복술 사이트는 2 계층 방식으로 닫힙니다. 우리 연구실은 복벽을 닫습니다 지속적인 패턴에 5-0 vicryl, 합성 봉합사를 사용합니다. 접착제 피부 접착제는 피부를 닫습하는 데 사용됩니다. 제거에 대한 외부 봉합이 없습니다.
- 마우스가 다음 밀접하게 가열 램프 (24인치 거리 케이지에서 분 거리)에서 (2 시간 45 분) 후 operatively 관찰, 개별 마우스 케이지에서 발견되며, 다음 원래 주택으로 돌아왔습니다. 그것이 연구 목적을 방해하지 않는 경우 진통제 및 안티 - 염증성 에이전트를 사용할 수 있습니다. 과학 고통 약품을 보류 칭의, 동물, 그리고 ICUCA의 승인이 필요합니다. 저희 연구실은 Buprenorphine ,0.05 - 0 0.1 MG / kg SQ 쥐를위한 훌륭한 사전 및 사후 수술 진통 것을 발견했습니다. 또한, 4mg/kg (0.4 ML / 1 %의 솔루션의 kg)에 Lidocaine는 체계적인 진통제가 실험 결과를 혼란시킬 수있다 때 절개 사이트에 들어갈 수 있습니다.
- 우리는 일반적으로 DVT로 인한 사후 수술 악영향을 발생하지 않습니다. 그러나 불리한 게시물 수술 효과가 자발적인 마취 사망, 수술 출혈 및 신경 외상으로 인해 일부 부전 마비를 포함할 수 있습니다. 복구 않으려하고 동물 먹이 누트리아 젤하거나 젖은 차우는 동물의 회복을 촉진하기 위해 새장 바닥에 놓여있을 수 있습니다. 끊어 포스트 수술 합병증과 동물은 euthanized 편안해야합니다.
- 지정된 시점에서 안락사는 설치류 동물에 대한 안락사에 미국 베티 의사회 가이드에 명시된 권장 사항에 따라 편안하게 수행됩니다.
3. 대표 결과
EIM은 지속적인 혈류의 존재에 혈전 형성하는 모델입니다. 다음 그림은이 소설의 모델 조사 매개 변수를 보여줍니다.
어디 25G 스테인리스의 그림 1 definesthe 해부 영역은색 코팅 동선 (KY - 30 - 1 - GRN, Electrospec, 도버, NJ)에 부착된 바늘이 삽입됩니다. 림프 노드가 거의 존재와 꼬리 IVC를 찾을 수 랜드마크로 도움이 있습니다.
그림 2 : 2 일 다른 변종의 EIM 후 혈전 무게. 예상했던대로, 혈전 무게 PAI - 1 KO 마우스의 하단과 hypercoagulable 델타 중부 표준시 마우스 (^ CT)에 큰되었습니다.
그림 3 : 가용성식이 P - selectin, 깊은 정맥 혈전증에 대한 제조 업체는 다른 종자로 측정되었다. 가장 높은 수준 hypercoagulable 델타 중부 표준시 마우스에서 발견된 반면 가장 낮은 수준은 PAI - 1 KO 마우스에서 발견되었습니다.
혈전 무게와 P - selectin 가용성이 다른 변종이 발견되었습니다 사이의 상관 관계를 그림 4. 참고의 짧은 혈전 크기를 생성한 그룹에서 감지 P - selectin 가용성은 (PAI - 1 KO 마우스) 가장 낮은되었습니다. 가장 큰 혈전 크기를 생성한 그룹에서 감지 P - selectin 가용성은 (hypercoagulable 델타 CT) 최고되었습니다.
그림 5 : 혈액 흐름의 존재를 증명하기 위해서는 초음파가 EIM을받은 생쥐에서 수행되었다. 그림 5 2 일 EIM 후 마우스로 진행 초음파를 보여줍니다. 그러면 표본은 수확했다. 혈전 형태 흐름의 존재에 혈전 형성을 제안하는 참고
Discussion
마우스 생체내 실험에 대한 훌륭한 연구 도구입니다. 따라서 밀접하게 질병이나 병적인 조건을 모방 마우스 모델의 개발이 필요합니다. 광화학 (2), 스테이 시스 (3-4), 기계적 외상 (5-6) : 여러 정맥 혈전증 마우스 모델을 포함 DVT을 연구하는 데 사용되었습니다. 그러나 이러한 모델 중 누구도 지속적인 혈류의 존재에 혈전을 생성하는 내부 내피 자극을 사용하지 않습니다. EIM은 IVC 내에서 전기 자극을 사용하여 혈액 흐름의 존재에 내피 활성화 (1) 정맥 thrombogenesis을 추진하고 있습니다. 그것은 쉽게 재현할 수, 기술적으로 간단하고 높은 생존율 (99 %)를하고 있습니다. 전류가 전기를 생성하는 데 사용됩니다 사실에도 불구하고, 열 (1) 생성되지 않습니다. EIM 모델은 밀접하게 임상 DVT을 시뮬레이션하고, 따라서 혈전 형성 및 해결의 본질적인 메커니즘을 연구를위한 가치있는 도구로 제공하고 있습니다. EIM 모델은 혈전증 질환에 대한 새로운 치료 접근의 발전에도 유용합니다.
Disclosures
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
NIH 1P01HL089407 - 01A1 (로렌스, PI), 동물 코어, NIH 한 K01 HL080962 - 01A2 (마이어스, PI)에 의해 지원됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Invitrogen | ABCD1234 |
References
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