Este método descreve como dissecar e avaliar o desenvolvimento da glândula mamária e na função de camundongos. Excisadas glândulas mamárias são avaliados quanto ao grau de desenvolvimento usando montar todo, enquanto a ejeção do leite é avaliada através de um ensaio de oxitocina baseado contração mioepiteliais celular.
A glândula mamária humana é composta de 15-20 lóbulos que secretam leite em um sistema de abertura de ramificação do ducto no mamilo. Os lobos são eles próprios composto por um número de unidades lobular terminal duto feito de alvéolos secretores e dutos convergentes 1. Em camundongos, uma arquitetura semelhante é observado na gestação em que ductos e alvéolos são intercalados dentro do estroma do tecido conjuntivo. O mouse epitélio da glândula mamária é uma árvore como sistema de dutos composto de duas camadas de células, uma camada interna de células luminais rodeado por uma camada externa de células mioepiteliais denotada pelos confins de uma membrana basal 2. Ao nascer, apenas uma árvore ductal rudimentar está presente, composto de um duto de ramos primários e 15-20. Alongamento ramo e começar a amplificação no início da puberdade, em torno de 4 semanas de idade, sob a influência de hormônios 3,4,5. Às 10 semanas, a maioria do estroma é invadida por um complexo sistema de dutos que passarão por ciclos de ramificação e de regressão em cada ciclo estral até que a gravidez 2. No início da gravidez, uma segunda fase de desenvolvimento começa, com a proliferação e diferenciação do epitélio de uva para formar estruturas em forma de leite secretoras chamadas alvéolos 6,7. Após o parto e durante a lactação, o leite é produzido por células secretoras luminal e armazenados dentro do lúmen dos alvéolos. Oxitocina lançamento, estimulada por um reflexo neural induzida pela amamentação dos filhotes, induz as contrações sincronizado das células mioepiteliais em torno dos alvéolos e ao longo dos canais, permitindo que o leite a ser transportado pelos dutos até o mamilo, onde se torna disponível para a 8 filhotes. Desenvolvimento da glândula mamária, diferenciação e função estão bem orquestrados e exigem, não só as interações entre o estroma eo epitélio, mas também entre as células mioepiteliais e dentro do epitélio luminal 9,10,11. Assim, mutações em muitos genes envolvidos nestas interações pode prejudicar tanto o alongamento ductal durante a puberdade ou alvéolos formação durante a gravidez precoce, a diferenciação no final da gravidez e ativação secretória levando a lactação 12,13. Neste artigo, descrevemos como dissecar as glândulas mamárias do mouse e avaliar o seu desenvolvimento usando monta todo. Também demonstramos como avaliar as contrações mioepiteliais e ejeção do leite através de um ex-vivo ensaio oxitocina baseado funcional. O efeito de uma mutação genética no desenvolvimento da glândula mamária e função pode assim ser determinada in situ através da realização de duas técnicas, em ratos controle mutante e do tipo selvagem.
Desenvolvimento da glândula mamária e função são bem orquestrado. Camundongos mutantes podem abrigar mutações genéticas que podem prejudicar o desenvolvimento da glândula mamária e função destacando a necessidade de avaliar a arquitetura da glândula 13,12. Montagem de todo pode ser realizada como descrito neste artigo em todas as fases de desenvolvimento da glândula mamária. Geralmente, o desenvolvimento do epitélio é avaliado no início da puberdade (~ 4 semanas de idade), no meio da puberda…
The authors have nothing to disclose.
Estes estudos foram financiados pelo CIHR e subvenções CBCRA para DWL. IP foi financiado por bolsas de CIHR-STP, FRSQ e CIHR. MKGS foi financiado por bolsas de estudo e OGS CIHR-STP. Os autores agradecem Kevin Barr por sua assistência com a criação do mouse.
Reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
Carmine | Sigma-Aldrich | C1022 |
Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A6435 |
Thymol | Sigma-Aldrich | T0501 |
Methyl salicylate | Sigma-Aldrich | M6752 |
Oxytocin | Sigma-Aldrich | O3251 |