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超音波標的マイクロバブル破壊テクニック入門

Published: June 12, 2011
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Summary

マイクロバブル破壊(UTMD)ターゲット超音波検査は、心臓や肝臓などの超音波にアクセス可能な臓器を標的とする治療用遺伝子を含む生理活性分子の部位特異的送達を、、、指示するために使用することができます。<sup> 1月6日</sup>。

Abstract

そのような目的の遺伝子をコードして負に荷電したプラスミドDNAベクターとしてUTMD、生理活性分子、で、脂質マイクロバブル造影剤7-9のカチオン性シェルに追加されます。マウスではこれらのベクトルを媒介するマイクロバブルは、心臓の左心室に静脈内投与、または直接投与することができます。大型動物ではそれらはまた冠動脈内カテーテルを通して注入することができます。循環から標的臓器へのその後の送達は、マイクロバブルの共振周波数で音響キャビテーションが発生します。それは力学的エネルギーがでたり、標的領域10の微小血管の内皮細胞との間の一時的な細孔形成におけるマイクロバブルの破壊の結果によって生成される可能性が高いようです。このソノポレーションの効果の結果として、内皮細胞へと全体のトランスフェクション効率が強化され、導入遺伝子をコードするベクターは、周囲の組織に堆積される。循環に残っているプラ​​スミドDNAは、さらに、非超音波組織への配信の可能性を低減し、非常に特異的な標的器官のトランスフェクションにつながる血、でヌクレアーゼによる急速に分解される。

Protocol

1。マイクロバブル株式の準備 10にPBSのMLSは、1gのグルコースと200 mgの1,2 – ジパルミトイル- sn -グリセロ-3 – ホスファチジルコリンと50mgの1,2 – ジパルミトイル- sn -グリセロ-3 – ホスファチジルエタノールアミンを混ぜる。 沸騰水浴中で混合物20〜30分、5分ごとに混合ピペットを加熱する。 ソリューションは、最大6ヶ月までは4℃で保存することができます。 <p class="…

Discussion

UTMDは、遺伝子デリバリーへの新しいアプローチを表しています。プラットフォーム技術としては、組織特異性の高度が望まれている生理活性分子の無数を提供するために、多くの潜在的な遺伝子治療の戦略のいずれかと組み合わせることができます。技法の主な生物学的限界は、トランスフェクションの効率が低いことです。もう一つの重要な考慮事項は、著しく骨や空気を介在すること?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

助成金は、NHLBI HL080532、NHLBI HL073449、NCRR RR16453、およびAHAナショナル費補助金援助賞(RVSに)含まれています。特別な感謝は、ビデオ制作ととDCDCを設立した教育グラント第P336C050047の米国務省への支援のため、距離のコースデザインとコンサルティング(DCDC)グループ、dcdcgroup.orgに拡張されます。

Materials

Name of the reagent/equipment Company Catalogue number Comments
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine Sigma-Aldrich P-5911 component of the microbubble lipid shell
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine Sigma-Aldrich P-3275 component of the microbubble lipid shell
glucose Sigma-Aldrich G5400 thought to stabilize the microbubbles
phosphate-buffered saline Sigma-Aldrich P5368  
glycerol Sigma-Aldrich G5516 believed to prevent microbubbles from coalescing
Octafluoropropane gas AirGas N/A inert gas used in clinical applications
VialMix dental amalgamator Bristol-Myers Squibb N/A  
1 MHz, 13mm, unfocused transducer Olympus A303S-SU  
20 MHz Function/Arbitrary Waveform Generator Agilent 33220A  
Power Amplifier Krohn-Hite Co. Model 7500  
Hydrophone Bruel and Kjaer Type 1803  
Charge Amplifier Bruel and Kjaer Type 2634  
500 MHz Oscilloscope LeCroy 9354L  
VisualSonics’ Vevo 2100 Imaging System with 34 MHz transducer VisualSonics 2100  
27G one inch tail vein catheters VisualSonics N/A  
Genie Plus infusion pump Kent Scientific GENIE  

References

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Cite This Article
Walton, C. B., Anderson, C. D., Boulay, R., Shohet, R. V. Introduction to the Ultrasound Targeted Microbubble Destruction Technique. J. Vis. Exp. (52), e2963, doi:10.3791/2963 (2011).

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