A aplicação de ligadura da artéria Cerebral Média Permanente no mouse
Summary
Ligadura da artéria cerebral média (MCA) é uma técnica para estudo da isquemia cerebral focal em modelos animais. Neste método, o da artéria cerebral média é exposto por craniotomia e ligados por cauterização. Este método dá volumes infarto altamente reprodutível e aumentou as taxas de sobrevivência pós-operatória em comparação com outros métodos disponíveis.
Abstract
Isquemia cerebral focal está entre o tipo mais comum de acidente vascular cerebral vista em pacientes. Devido à importância clínica, tem havido um esforço prolongado para desenvolver modelos animais adequados para o estudo dos eventos que acontecem durante o insulto isquêmico. Estas técnicas incluem transitória ou permanente, modelos de isquemia focal ou global usando muitos diferentes modelos animais, com os roedores mais comuns são.
O método de ligadura permanente MCA que também é referido como pMCAo na literatura é usado extensivamente como um modelo de isquemia focal em roedores 1-6. Este método foi originalmente descrito para ratos por Tamura et al. em 1981 7. Neste protocolo uma craniotomia foi usado para acessar o MCA e as regiões proximal foram ocluídas por eletrocoagulação. Os infartos envolvem regiões principalmente cortical e às vezes estriado, dependendo da localização da oclusão. Esta técnica está agora bem estabelecida e usada por muitos laboratórios 8-13. Utilização precoce desta técnica levou à definição e descrição do "core infarto" e "penumbra" 14-16, e é freqüentemente usado para avaliar o potencial neuroprotetor compostos 10, 12, 13, 17. Embora os estudos iniciais foram realizados em ratos, ligadura MCA permanente tem sido usado com sucesso em camundongos com ligeiras modificações 18-20.
Este modelo produz infartos reprodutível e aumento da sobrevivência pós-taxas. Aproximadamente 80% dos acidentes vasculares cerebrais isquêmicos em humanos acontecem na área MCA 21 e, portanto, este é um modelo muito relevante para os estudos acidente vascular cerebral. Atualmente, há uma escassez de tratamentos eficazes disponíveis para pacientes com AVC, e, portanto, há uma necessidade de bons modelos para testar o potencial de compostos farmacológicos e avaliar os resultados fisiológicos. Este método também pode ser usada para estudar mecanismos de resposta a hipóxia intracelular in vivo.
Aqui, apresentamos a cirurgia de ligadura MCA em um rato C57/BL6. Descrevemos a preparação pré-cirúrgica, MCA cirurgia de ligadura e 2,3,5 trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC) para quantificação dos volumes de infarto.
Protocol
Discussion
O método de ligadura permanente MCA dá volumes infarto altamente reprodutível e aumentou as taxas de sobrevivência pós-operatória em comparação com outros métodos disponíveis. A facilidade ea curta duração (~ 30 min) do processo de torná-lo ainda mais prático. O método é amplamente utilizado em ambos os ratos e ratazanas.
Esta técnica requer uma cirurgia invasiva sob um estereomicroscópio. Portanto, a experiência em operar sob um microscópio e aperfeiçoando uma craniotom…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
A técnica cirúrgica foi originalmente adquirida no laboratório do Dr. William D. Hill, do Medical College of Georgia. Os autores também gostariam de agradecer ao Dr. David A. Rempe e Landa Prifti para o uso da câmera dissecção. Esta pesquisa foi suportada pelo NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 e 30815697D AHA.
Materials
| NAME | COMPANY AND CATALOGUE NUMBER |
|---|---|
| A. Solutions and Chemicals | |
| Povidone-Iodine Solution, Surgical Scrub | Aplicare, 82-209 |
| 70% Ethanol | Koptec, V1001 |
| 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma, T8877 |
| 4% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences, 159SP |
| Phosphate Buffered Saline, pH:7.4 | Made and sterilized in the lab. |
| Mineral Oil | PML Microbiologicals, R6570 |
| Isofluorane | The Butler Company, 029405 |
| Buprenorphine (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 |
| Artificial tears | The Butler Company, 007312 |
| Recovery Gel | Clear H2O, 72-01-5022 |
| B. Surgical Materials and Equipment | |
| C57/BL6 mouse, 10-12 weeks old | The colony was bred in the university vivarium |
| 100% oxygen tank | Airgas |
| Anesthetic Vaporizer and Flow meter | Surgivet, Model 100 |
| Heating Pad with Rectal Probe | Fine Science Tools, TR200 |
| Dissecting microscope | Zeiss, Stemi 2000 |
| Heating panel | Petco Services Ltd. 0307-013 |
| Small Vessel Cauterizer Set | Fine Science Tools, 18000-00 |
| Mini Peristaltic Pump | Harvard Apparatus, MPII |
| 1ml syringe | BD, 329650 |
| 18G needle | Becton Dickinson, 305196 |
| Surgical 5.0 Nylon Suture | Ethilon, 698H |
| Sectioning Block | Kent Scientific, 1mm |
| Single Edge Razor Blades | Electron Microscopy Sciences, 71962 |
| Label Tape | Scienceware, Bel-art Products F13463-2075 |
| Gauze Sponges | Kendall Curity 2252, Johnson and Johnson 6415 |
| Cotton Tip Applicators | Puritan 806-WCL |
| C. Surgery Tools | |
| Surgical Spring Scissors | Fine Science Tools 15003-08 |
| Microdissecting forceps angled | Fine Science Tools 5/45 |
| Microdissecting forceps curved | Fine Science Tools 5 Ti |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools 14568-12 |
| Curved bone rongeur | Fine Science Tools 16021-14 |
| Hartman Hemostat Curved | Fine Science Tools 13003-10 |
Table 1. The list of materials, tools and chemicals used for the MCA ligation procedure. A. Solutions and Chemicals, B. Surgical Materials and Equipment, C. Surgery Tools.
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