تشكيل الأنبوبة Matrigel القائم على الفحص لتقييم نشاط الخلايا السرطانية مكون للأوعية
Summary
ويستخدم فحص أنبوب تشكيل لتقييم نشاط الأوعية الدموية للخلايا السرطانية.
Abstract
على مدى العقود العديدة الماضية ، وهي مقايسة تشكيل باستخدام أنبوب عامل نمو مخفض تم Matrigel يعملون عادة للتدليل على النشاط عائية من خلايا بطانة الأوعية الدموية في المختبر 1-5. ومع ذلك ، فقد أظهرت أدلة متزايدة مؤخرا ان لا يقتصر هذا الاختبار لاختبار سلوك الأوعية الدموية للخلايا بطانة الأوعية الدموية. بدلا من ذلك ، كما تم استخدامها لاختبار قدرة عدد من الخلايا السرطانية لتطوير النمط الظاهري الأوعية الدموية 6-8. وهذه القدرة بما يتفق مع سلوكهم مكون للأوعية التي تم تحديدها في الحيوانات xenotransplanted ، وهي عملية تعرف باسم مكون للأوعية المحاكاة (VM) 9. هناك العديد من الأدلة تثبت أن الخلية السرطانية بوساطة VM تلعب دورا حيويا في تطوير الورم ، ومستقلة عن الأوعية الدموية الخلية البطانية 6 ، 10-13. على سبيل المثال ، تم العثور على الخلايا السرطانية للمشاركة في الدم perfused ، وتشكيل قناة الأوعية الدموية في عينات من الانسجة من المرضى سرطان الجلد وورم أرومي دبقي 8 ، 10 ، 11. هنا ، وصفنا هذا الاختبار شبكة أنبوبية ، باعتبارها أداة مفيدة في تقييم نشاط مكون للأوعية من خلايا الورم. وجدنا أن بعض خطوط الخلايا السرطانية مثل سرطان الجلد B16F1 خلايا ورم أرومي دبقي U87 خلايا ، وسرطان الثدي MDA – MB – 435 الخلايا قادرة على تشكيل الأنابيب الأوعية الدموية ، ولكن البعض لا مثل سرطان القولون HCT116 الخلايا. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النمط الظاهري الأوعية الدموية تعتمد على الأرقام الخلية مطلي على Matrigel. لذا ، قد يكون هذا الفحص بمثابة أداة قوية لفحص الأوعية الدموية المحتملة لمجموعة متنوعة من أنواع الخلايا بما فيها خلايا الأوعية الدموية ، والخلايا السرطانية فضلا عن خلايا أخرى.
Protocol
Discussion
من أجل هذا الاختبار أن تنجح ، يجب اختبار نوعية Matrigel الأولى. ويمكن الحصول على عينة صغيرة من العلوم البيولوجية دينار بحريني إلى ما قبل تشغيل الفحص باستخدام HMVECs. قد منتجات مختلفة دفعة عرض الصفات التي تختلف بعض الكثير لا توفر شرط الأمثل لتشكيل الأنبوب. ثانيا ، ينبغي تجنب ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل لجنة التحقيق الوطنية R01 CA120659 (RS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 11995 |
| FBS | Invitrogen | 16000-044 |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD Bioscience | 47743-720 |
| EBM2 kit | Lonza | CC-3156 |
| Nikon ECLIPSE TS100 microscope | Nikon |
References
- Shao, R., Guo, X. Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis. Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).
- Ribeiro, M. J. Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium. Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).
- Ades, E. W. HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line. J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).
- Shao, R. Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression. Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).
- Shao, R. YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis. Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).
- Basu, G. D. A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells. Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).
- Scavelli, C. Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma. Oncogene. 27, 663-674 (2008).
- El Hallani, S. A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry. Brain. 133, 973-982 (2010).
- Maniotis, A. J. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry. American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).
- Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma. Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).
- Folberg, R. Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns. American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).
- Liu, C. Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors. 암 연구학. 62, 5470-5475 (2002).
- Sood, A. K. The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy. Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).
- Shirakawa, K. Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft. 암 연구학. 62, 560-566 (2002).
- Ruf, W. Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry. 암 연구학. 63, 5381-5389 (2003).
- Seftor, R. E. Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma. 암 연구학. 61, 6322-6327 (2001).
- Shirakawa, K. Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer. International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).
