A Matrigel-Based Assay formação do tubo para avaliar a atividade vasculogênica de células tumorais

Summary

A formação do tubo de ensaio é usado para avaliar a atividade vascular das células tumorais.

Abstract

Ao longo dos últimas décadas, um ensaio de formação do tubo utilizando fator de crescimento reduzida Matrigel foi tipicamente utilizados para demonstrar a atividade angiogênica das células endoteliais vasculares in vitro ^1-5. No entanto, a evidência crescente recentemente demonstrou que este ensaio não se limita a testar o comportamento vascular para as células endoteliais. Em vez disso, ele também tem sido utilizado para testar a capacidade de um número de células tumorais para desenvolver um fenótipo vascular ^6-8. Esta capacidade foi coerente com seu comportamento vasculogênica identificados em animais xenotransplanted, um processo conhecido como mimetismo vasculogênica (VM) ^9. Há uma infinidade de provas que demonstrem que VM mediada por células tumorais desempenha um papel vital no desenvolvimento do tumor, independente de angiogênese da célula endotelial ^{6, 10-13.} Por exemplo, as células tumorais foram encontradas para participar na formação do sangue perfundido canal, vascular em amostras de tecido de melanoma e glioblastoma pacientes ^{8, 10, 11.} Aqui, descrevemos neste ensaio rede tubular como uma ferramenta útil na avaliação da atividade vasculogênica de células tumorais. Descobrimos que algumas linhagens de células tumorais, como o melanoma B16F1 células, as células U87 glioblastoma, e câncer de mama MDA-MB-435 células são capazes de formar túbulos vascular, mas algumas não, como câncer de cólon HCT116 células. Além disso, este fenótipo vascular é dependente número de células banhado no Matrigel. Portanto, este ensaio pode servir como poderoso utilitário para a tela o potencial vascular de uma variedade de tipos de células, incluindo células vasculares, as células tumorais, bem como outras células.

Protocol

1. A Matrigel-Based Assay formação do tubo para avaliar a atividade vasculogênica de células tumorais Preparação de células tumorais e células endoteliais microvasculares: células de tumor cerebral, como U87, células de melanoma B16F1, câncer de mama MDA-MB-435, e as células do cólon HCT116 foram cultivadas em DMEM suplementado com 10% FBS e penicilina / estreptomicina (todos da Invitrogen ). Células endoteliais microvasculares linhagem humana de células endoteliais (HMVECs) foram cultivados em…

Discussion

Para que este ensaio para o sucesso, a qualidade do Matrigel deve ser testada primeiro. Uma pequena amostra pode ser obtido a partir de BD Bioscience de pré-executar o teste usando HMVECs. Produtos de lote diferente pode exibir qualidades diferentes em que alguns lotes não fornecem uma condição ideal para a formação do tubo. Em segundo lugar, as bolhas devem ser evitados quando uma alíquota de Matrigel é carregado em placas de 96 poços, porque as bolhas podem interromper a formação de túbulos. Se pequenas bo…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
DMEM	Invitrogen	11995
FBS	Invitrogen	16000-044
Growth factor-reduced Matrigel	BD Bioscience	47743-720
EBM2 kit	Lonza	CC-3156
Nikon ECLIPSE TS100 microscope	Nikon