ゾレドロネートを使用してヒト末梢血γδT細胞の拡大
Summary
末梢血単核細胞（PBMC）からのγδT細胞を拡大する方法が記載されている。 PBMC由来のγδT細胞を刺激し、ゾレドロネートとインターロイキン-2（IL – 2）を使用して展開されます。 γδT細胞の大規模の拡大は、癌の自家細胞免疫療法に適用することができます。
Abstract
人間のγδT細胞が認識し、ストレス誘発抗原のさまざまに反応する、それによって生来の広範な抗腫瘍および抗感染活動を展開することができます。末梢血中のγδT細胞の1大多数がVγ9Vδ2T細胞受容体を持っている。これらの細胞は主要組織適合性複合体に依存しない方法で抗原を認識し、強力な細胞傷害性とTh1細胞のようなエフェクター機能を開発する。1したがって、γδT細胞は、癌免疫療法のための魅力的な候補エフェクター細胞である。 Vγ9Vδ2T細胞は、次のようなphosphoantigensに対応する（E）-4 -ヒドロキシ-3 -メチル-ブト-2 -エニルピロリン酸（HMBPP）、イソプレノイド生合成を介して細菌で合成され、生成される2、イソペンテニルピロリン酸（IPP）、メバロン 酸経路を介して真核細胞で。生理的な状態で3、非形質転換細胞におけるIPPの世代は、γδT細胞の活性化のために十分ではありません。腫瘍細胞でのメバロン 酸経路の調節不全は、IPPの蓄積とγδT細胞の活性化につながる。3 aminobisphosphonatesが（そのようなパミドロネートまたはゾレドロネートなど）ファルネシルピロリン酸合成酵素（FPPS）、メバロン 酸経路でIPPの下流で作用する酵素の細胞内レベルを抑制するので、 IPPとγδT細胞の認識にsensitibityは、治療上aminobisphosphonates増加させることができる。 IPPの蓄積は私たちにaminobisphosphonatesとγδT細胞を活性化することによって、癌の免疫療法を可能にすること、aminobisphosphonatesの薬理学的に関連する濃度で腫瘍細胞よりもnontransfomred細胞に効率的ではありません。おもしろい4 PBMCがaminobisphosphonatesで処理されるとき、IPPのために効率的で、単球に蓄積これらの細胞による薬物取り込み。IPPとなる抗原提示細胞を蓄積し、末梢血でVγ9Vδ2T細胞を刺激する5単球6これらのメカニズムに基づいて、我々は、ゾレドロネートおよびインターロイキンを使用して、γδT細胞培養物の大規模展開のための技術を開発-2（IL – 2）。γδT細胞の拡大のための7他の方法は、合成phosphoantigensのブロモヒドリンピロリン酸（BrHPP）8または2 -メチル-3 -ブテニル-1 -ピロリン酸（2M3B1PP）を利用する。これらのメソッドの9すべてがexを許可養子免疫療法における使用のためのγδT細胞の多数の結果in vivoでの展開、。ただし、ゾレドロネートがFDA承認された市販の試薬です。ゾレドロネート-拡張されたγδT細胞はCD27を表示– CD45RA –エフェクターメモリー表現型とそれらの機能は、IFN -γ産生アッセイによって評価することができる7。
Protocol
Discussion
ここで紹介する方法は、PBMCからのγδT細胞の効率的な展開を可能にします。ゾレドロネートで活性化と拡大γδT細胞とIL – 2は、サイトカイン産生と細胞毒性によって反射された完全なエフェクター機能を、開発する。それが合成phosphoantigensのブロモヒドリンピロリン酸（BrHPP）と2 – メチル-3 – ブテニル-1 – ピロリン酸（2M3B1PP）ことが報告されてもγδT細胞を展開していますが、それらは市販さ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| ZOMETA | Novartis Pharma K. K | zoledronate | |
| PROLEUKIN | Novartis Pharmaceuticals | human recombinant IL-2 | |
| BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with Sodium Heparin | BD | 362753 | |
| RPMI1640 | Invitrogen | 21870-076 | |
| ALyS203- medium | Cell Science & Technology Institute | 0301-7 | |
| OpTmizer | Invitrogen | 0080022SA | |
| brefeldin A | Sigma | B5936-200UL | |
| phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma | P1585-1MG | |
| ionomycin | Sigma | 13909-1ML | |
| IntraPrep | BECKMAN COULTER | A07803 | |
| anti-human CD3-FITC or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07746 FITC A07749 PE/Cy5 |
|
| anti-human CD4-ECD | BECKMAN COULTER | 6604727 | |
| anti-human CD8-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607011 | |
| anti-human CD14-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07765 | |
| anti-human CD19-PE | BECKMAN COULTER | A07769 | |
| anti-human CD45-ECD | BECKMAN COULTER | A07784 | |
| anti-human CD56-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07789 | |
| anti-human TCRαβ-PE | BECKMAN COULTER | A39499 | |
| anti-human TCR Vγ9-FITC | BECKMAN COULTER | IM1463 | |
| anti-human CD27-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607107 | |
| anti-human CD45RA-ECD | BECKMAN COULTER | IM2711 | |
| anti-human CD69-PE | BD | 555531 | |
| anti-human NKG2D-PE | BECKMAN COULTER | A08934 | |
| Anti-humal IFNγ-PE | BECKMAN COULTER | IM2717U | |
| Mouse IgG1 isotype control-PE | BECKMAN COULTER | A07796 | |
| Mouse IgG1 isotype control-ECD or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07797 A07798 |
References
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