Transfection ג'ין ידי electroporation הוא השתפר בכ פעמיים כאשר הכיוון של השדה החשמלי משתנה במהלך יישום הדופק, תוך כדאיות התא אינו מושפע. הגידול transfection גן נגרמת על ידי גידול של אזור קרום המורכב המוסמכת לכניסת ה-DNA לתוך התא.
Abstract
ג'ין electrotransfer היא שיטה גופנית השתמשו כדי להעביר גנים לתוך התאים על ידי יישום של פולסים חשמליים קצר ואינטנסיבי, אשר גורמות היציבות של קרום התא, מה שהופך אותו חדיר למולקולות קטנות מאפשר העברה של מולקולות גדולות כמו דנ"א. הוא מייצג אלטרנטיבה וקטורים ויראליים, בשל יעילותו, בטיחות וקלות היישום. עבור הגן electrotransfer פרוטוקולים שונים הדופק חשמלי משמשים על מנת להשיג transfection גן מקסימלית, ואחד מהם הוא לשנות את כיוון השדה החשמלי אוריינטציה במהלך הלידה את הדופק. שינוי כיוון השדה החשמלי אוריינטציה להגדיל את שטח קרום המוסמכת לכניסת ה-DNA לתוך התא. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את ההבדל יעילות electrotransfer הגן כאשר כל הפולסים נשלחים באותו כיוון כאשר פולסים מועברים על ידי שינוי לחילופין לכיוון שדה חשמלי בכיוון. לקבלת הטיפ מטרה זו עם אלקטרודות משולב מתח גבוה גנרטור אב טיפוס, המאפשרת שינוי של שדה חשמלי בכיוונים שונים במהלך יישום פולס חשמלי, היו בשימוש. יעילות ג'ין electrotransfer נקבע 24 שעות לאחר היישום דופק כמו במספר התאים לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק מחולק למספר של כל התאים. התוצאות מראות כי transfection הגן הוא גדל כאשר כיוון השדה החשמלי בזמן הלידה הדופק חשמלי משתנה.
Protocol
1. תרבית תאים, פלסמיד והכנת חיץ לצורך הניסוי בניסוי זה סינית השחלה אוגר תאים (CHO-K1) משמשים. התאים גדלים בתערובת מזין HAM-F12 (PAA) בתוספת 2 מ"מ L-גלוטמין, 10% בסרום שור עוברית, 400 μl / l גנטמיצין (כולם סיגמא אולדריץ Chemie GmbH, Deisenhofen, ג?…
Discussion
ג'ין electrotransfer היא טכניקה ביוטכנולוגיה צדדי המאפשר העברת דנ"א לתוך התאים באמצעות יישום קצר, פולסים חשמליים במתח גבוה 3 ומהווה חלופה בטוחה יותר וקטורים ויראליים בשל יעילותו, בטיחות וקלות היישום. למרות הגן electrotransfer כיום בשימוש נרחב transfect כל סוגי התאים בשלב הרא?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי הסוכנות למחקר סלובנית (פרויקט J2-9770, IP-0510 מרכז תשתית תוכנית P2-0249). וידאו זה מהווה חומר משלים עבור "electroporation מבוססי טכנולוגיות וטיפולים" סדנה מדעית קורס אקדמי, המאורגן על ידי הפקולטה להנדסת חשמל באוניברסיטת ליובליאנה, סלובניה. המחברים מודים גם Duša Hodžič עבור באדיבות מתן פלסמיד דנ"א.
Pavlin, M., Haberl, S., Reberšek, M., Miklavčič, D., Kandušer, M. Changing the Direction and Orientation of Electric Field During Electric Pulses Application Improves Plasmid Gene Transfer in vitro. J. Vis. Exp. (55), e3309, doi:10.3791/3309 (2011).