の可視化線虫（Caenorhabditis elegans）キューティクルの構造
Summary
我々は、ライブでキューティクルを可視化する手法を提案<em> C.エレガンス</em>一般的に使用される赤色蛍光親油性色素DII（1,1' – ジオクタデシル- 3、3,3'、3' – tetramethylindocarbocyanine過塩素酸塩）を使用して、<em> C.エレガンス</em>環境的に露出した神経細胞を可視化する。この最適化されたプロトコルで、alaeと環状のクチクラ構造は、DIIによって染色し、化合物の顕微鏡を用いて観察される。
Abstract
C.のクチクラelegansは動物1-4の外側を取り囲む非常に強い構造です。キューティクルだけではなく環境から動物を保護するだけでなく、ボディの形状を決定し、運動性4-6に役割を果たしている。表皮細胞から分泌されるいくつかの層は最も外側の脂質層7を含む、キューティクルを構成しています。
キューティクルの円周尾根はannulusの複数形のパターン動物の長さと呼ばれ、開発8のすべての段階で存在している。 AlaeはL1、dauer、そして大人のステージ2,9を含む開発の特定の段階で、中に存在する縦方向の尾根です。クチクラコラーゲンの組織に影響を及ぼす遺伝子の変異は、クチクラ構造と動物の体の形態5,6,10,11を変更することができます。 DIC光学系と化合物の顕微鏡を使用してクチクラのイメージングが可能ですが、クチクラ構造を強調する現在の方法は、蛍光を含むセントジーン発現12、抗体染色13、および電子顕微鏡1。ラベルの付いた小麦胚芽レクチン（WGA）もクチクラ糖タンパク質を可視化するために使用されていますが、細かいクチクラ構造14を解決するために制限されています。蛍光色素を使用してクチクラ表面の染色が観察されたが、詳細に15に特徴がないされています。我々は、ライブCでキューティクルを可視化する手法を提案一般的にC言語で使用されている赤色蛍光親油性色素DII（1,1' -ジオクタデシル- 3、3,3'、3' – tetramethylindocarbocyanine過塩素酸塩）を、使用して虫elegansの環境にさらされるニューロンを可視化する。 DIIの染色のためのこの最適化されたプロトコルは、annulusの複数形、alae、外陰部、男性の尾、およびCの雌雄同体尾のスパイクの高分解能蛍光可視化するための、シンプルで堅牢な方法です。 エレガンス 。
Protocol
Discussion
ここで紹介するDIIの染色法は、C. elegansのキューティクルを視覚化するため、比較的迅速かつ便利な方法が可能になります。一般的に画像環境にさらされる感覚ニューロン15,17に使用される方法を再利用して最適化することにより、DIIは、蛍光alaeと環状構造（図1および図2）だけでなく、外陰部、男性の尾、および両性テールスパイクの両方を染色するために使用することがで?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々はS.タネジャ-バゲスワル、K. Beifuss、S. Kedroske、そしてHCに感謝したい。有用な議論のためのシャオ。この作品は、分子細胞医学のTAMHSC省からの資金投入を開始することによって資金を供給された。化合物の範囲や回転するディスクは、部門とディーンのTAMHSC Officeが提供する資金で購入した。一部の菌株は、研究資源のためのナショナルセンターによって資金を供給される線虫遺伝学センターによって提供されていました。 pRF4は（ROL – 6（su1006））A.火災の贈り物だった。
Materials
| Reagents | Synonyms | Company | Catalogue number | Comments |
| DiI | 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate | Biotium, Inc. | 60010 | Stock dilution: 20 mg/mL in DMF working dilution: 30 mg/mL |
| DMF | Dimethylformamide | Sigma-Aldrich, Inc. | D4551 | |
| Triton X-100 |
Octylphenoxypolyethoxyethanol | VWR International, LLC. | EM-9410 | |
| M9 | 22mM KH2PO4, 42mM Na2HPO4, 86mM NaCl, 1mM MgSO4 | |||
| NGM | Nematode growth medium | IPM Scientific, Inc. | 11006-501 | Can be prepared following NGM agar protocol18 |
| Agar-agar | EMD Chemicals, Inc. | 1.01614 | 4% in water | |
| Levamisole | Levamisole hydrochloride | Sigma-Aldrich, Inc. | 31742 | 100 μM – 1 mM levamisole as required |
| Microscope slides | VWR International, LLC. | 16005-106 | ||
| Microscope cover glasses | VWR International, LLC. | 16004-302 | ||
| Compound scope | Carl Zeiss, Inc. | A1m | Use objectives to match the needs of the experiment | |
| TRITC or other compatible filter | Chroma Technology Corp. | 49005 | ET – DSRed (TRITC/Cy3) sputtered filter set |
References
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