マルチカラーで神経回路の地形を明らかにし
Summary
我々は、トレーサーを提供するための実用的なガイドを提供<em> in vivoで</em>とマウスで成功神経回路の解析に不可欠な手順を示すために、モデル系として脊髄小脳路を使用してください。我々は詳細にAlexaの蛍光物質に結合した小麦胚芽レクチン（WGA）を悪用私たちの多彩なトレースプロトコルについて説明します。
Abstract
神経回路は、機能的な地形図にまとめられています。複雑な回路のアーキテクチャを視覚化するために我々は、複数の地形予測のグローバルなパターン形成を確実にラベルを付けるためにアプローチを開発した。小脳は、神経回路の整然とした配置を研究する理想的なモデルです。例えば、脊髄小脳苔状繊維のコンパートメントの組織は、苔状線維のパターン形成を研究するための不可欠なシステムであることが実証されています。我々は最近、アレクサ555と488コンジュゲート小麦胚芽レクチン（WGA）が開発し、成体マウスの脊髄小脳苔状線維の投射をトレースするために使用できることを示した（Reeberら2011）。我々は、神経突起を標識するためWGA -アレクサトレーサー望ましいツールを作る三大特性を発見した。最初に、Alexaの蛍光色素は強烈であり、その明るさは、直接トレースした後wholemountイメージングが可能になります。第二に、WGA -アレクサトレーサーは、開発の全体軌跡と大人の神経projectioにラベルを付けるNS。第三に、WGA – Alexaのトレーサーは、急速に逆行し、順行性の両方の方向に輸送される。ここでは、トレーサーと他の必要なツール、脊髄小脳トレースのための手術を実行する方法とどのように最高の三次元の画像トレースされた突起を準備する方法について詳細に説明します。要約すると、我々だけでなく小脳のでなく、皮質、脳幹、及び脊髄における機能地図の組織との接続を解読するのに有用となるステップバイステップのトレースプロトコルを提供しています。
Protocol
Discussion
我々は急速に発展し、成体マウスでは神経突起を標識するための新規蛍光ベースのアプローチを使用してトレースする軸索に成功し、樹状突起に必要な外科的および技術的な詳細を記載している。 WGA -アレクサを使用して、我々は、トレーサーとマーカーが高解像度で三次元のパターン化された回路の地形を分析するために使用することができる方法を示します。
多く?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、RVSのスタートアップ資金イェシーバー大学の医学のアルバートアインシュタイン大学から新たな研究者によってサポートされていました。
Materials
| Equipment/Reagents | Model/Catalogue number | Company |
| Bead sterilizer | Model Steri 250 Cat. # 18000-45 | Fine Science Tools |
| Cauterizer | Cat. # 18000-00 | Fine Science Tools |
| Borosilicate glass capillaries | Cat. # 300056 | Harvard Apparatus |
| Dual stage Glass Micropipette Puller | Model 001-PC-10 | Narishige |
| Micrometer syringe | Cat. # GS-1100 | Gilmont Instruments |
| Small Animal Stereotaxic Instrument | Model 940-A | Kopf Instrumentation |
| Electrode Manipulator | Model 960 | Kopf Instrumentation |
| Vetcare chamber | Cat. # 340508 | Harvard Apparatus |
| Heating Pad | Cat. # 341241 | Harvard Apparatus |
| Leica DFC360 FX camera | DFC360 FX | Leica |
| Leica DFC490 camera | DFC490 | Leica |
| Leica DM5500 microscope | DM5500 | Leica |
| Leica DFC3000 FX camera | DFC3000 FX | Leica |
| Leica MZ16 FA microscope | MZ16 FA | Leica |
| CY3 Filter | Model # 11600231 | Leica |
| FITC Filter | Model # 11513880 | Leica |
| A4 DAPI/UV filter | Model # 11504162 | Leica |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 488 conjugate | Cat. #W11261 | Invitrogen |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 555 conjugate | Cat. #W32464 | Invitrogen |
References
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