Выявление нейронных Топография округа в многоцветном
Summary
Мы предоставляем практическое руководство для доставки трейсеров<em> В естественных условиях</em> И использовать спиноцеребеллярные путь в качестве модельной системы для демонстрации существенных шагов для успешного анализа нейронной схемы на мышах. Мы подробно описать наш универсальный трассировки протокола, который использует агглютинин зародышей пшеницы (WGA), конъюгированные с Alexa флуорофоров.
Abstract
Нейронных цепей организованы в функциональные топографических карт. Для того, чтобы визуализировать сложную архитектуру схему мы разработали подход к этикетке надежно глобальных паттернов несколько топографических проекций. Мозжечок является идеальной моделью для изучения упорядоченное расположение нейронных цепей. Например, compartmental организации спиноцеребеллярные мшистые волокна оказалась необходимой системой для изучения паттернов мшистых волокон. Недавно мы показали, что зародыши пшеницы агглютининов (WGA), конъюгированные с Alexa 555 и 488 могут быть использованы для отслеживания спиноцеребеллярные мшистые волокна прогнозы в области разработки и взрослых мышей (Reeber и соавт. 2011). Мы нашли три основных свойства, которые делают WGA-Alexa индикаторов желательно инструменты для маркировки нейронных проекций. Во-первых, Alexa флуорофоров являются интенсивными и их яркость позволяет wholemount изображений непосредственно после трассировки. Во-вторых, WGA-Alexa индикаторов этикетке всей траектории развития и взрослых нейронные projectioнс. В-третьих, WGA-Alexa индикаторов быстро транспортировать в обоих ретроградной и антероградной направлениях. Здесь мы подробно описывают, как подготовить индикаторы и другие необходимые инструменты, как проводить операцию по отслеживанию спиноцеребеллярные и как лучше всего прослеживается изображение проекции в трех измерениях. Таким образом, мы обеспечиваем шаг за шагом трассировки протокола, которые будут полезны для расшифровки организации и подключения функциональных карт не только в мозжечке, но и в коре головного мозга, ствола мозга и спинного мозга.
Protocol
Discussion
Мы описали хирургических и технических деталей, необходимых для успешного аксонального и дендритов трассировку новых флуоресцентных подход для быстрой маркировки нейронные прогнозы в области разработки и взрослых мышей. Использование WGA-Alexa мы покажем, как индикаторы и маркеры могут…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана новым следователем стартовый капитал от Альберта Эйнштейна Медицинского колледжа университета Ешива в РВС.
Materials
| Equipment/Reagents | Model/Catalogue number | Company |
| Bead sterilizer | Model Steri 250 Cat. # 18000-45 | Fine Science Tools |
| Cauterizer | Cat. # 18000-00 | Fine Science Tools |
| Borosilicate glass capillaries | Cat. # 300056 | Harvard Apparatus |
| Dual stage Glass Micropipette Puller | Model 001-PC-10 | Narishige |
| Micrometer syringe | Cat. # GS-1100 | Gilmont Instruments |
| Small Animal Stereotaxic Instrument | Model 940-A | Kopf Instrumentation |
| Electrode Manipulator | Model 960 | Kopf Instrumentation |
| Vetcare chamber | Cat. # 340508 | Harvard Apparatus |
| Heating Pad | Cat. # 341241 | Harvard Apparatus |
| Leica DFC360 FX camera | DFC360 FX | Leica |
| Leica DFC490 camera | DFC490 | Leica |
| Leica DM5500 microscope | DM5500 | Leica |
| Leica DFC3000 FX camera | DFC3000 FX | Leica |
| Leica MZ16 FA microscope | MZ16 FA | Leica |
| CY3 Filter | Model # 11600231 | Leica |
| FITC Filter | Model # 11513880 | Leica |
| A4 DAPI/UV filter | Model # 11504162 | Leica |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 488 conjugate | Cat. #W11261 | Invitrogen |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 555 conjugate | Cat. #W32464 | Invitrogen |
References
- Apps, R., Hawkes, R. Cerebellar cortical organization: a one-map hypothesis. Nat. Rev. Neurosci. 10, 670-681 (2009).
- Grishkat, H. L., Eisenman, L. M. Development of the spinocerebellar projection in the prenatal mouse. J. Comp. Neurol. 363, 93-108 (1995).
- Mesulam, M. . Tracing neural connections with horseradish peroxidase. , (1982).
- Reeber, S. L., Sillitoe, R. V. Patterned expression of a cocaine- and amphetamine regulated transcript (CART) peptide reveals complex circuit topography in the rodent cerebellar cortex. Journal of Comparative Neurology. , (2011).
- Reeber, S. L., Gebre, S. A., Sillitoe, R. V. Fluorescence mapping of afferent topography in three dimensions. Brain. Struct. Funct. , (2011).
- Sillitoe, R. V., Stephen, D., Lao, Z., Joyner, A. L. Engrailed homeobox genes determine the organization of Purkinje cell sagittal stripe gene expression in the adult cerebellum. J. Neurosci. 28, 12150-12162 (2008).
- Sillitoe, R. V., Vogel, M. W., Joyner, A. L. Engrailed homeobox genes regulate establishment of the cerebellar afferent circuit map. J. Neurosci. 30, 10015-10024 (2010).
- Vig, J., Goldowitz, D., Steindler, D. A., Eisenman, L. M. Compartmentation of the reeler cerebellum: segregation and overlap of spinocerebellar and secondary vestibulocerebellar fibers and their target cells. 신경과학. 130, 735-744 (2005).
- Vogel, M. W., Prittie, J. Topographic spinocerebellar mossy fiber projections are maintained in the lurcher mutant. J. Comp. Neurol. 343, 341-351 (1994).
- Voogd, J., Broere, G., van Rossum, J. The medio-lateral distribution of the spinocerebellar projection in the anterior lobe and the simple lobule in the cat and a comparison with some other afferent fibre systems. Psychiatr. Neurol. Neurochir. 72, 137-151 (1969).
- Wu, H. S., Sugihara, I., Shinoda, Y. Projection patterns of single mossy fibers originating from the lateral reticular nucleus in the rat cerebellar cortex and nuclei. J. Comp. Neurol. 411, 97-118 (1999).
