Radioterapia em uma combinação ortotópico modelo de tumor de cérebro de camundongos

Summary

O objetivo deste artigo é descrever o uso de um modelo de glioblastoma ortotópico para estudos quimioradioterapia. Este artigo irá passar por transformação celular, implantação, e radioterapia do mouse através de um modelo intracraniana.

Abstract

O glioblastoma multiforme (GBM) são os mais comuns e agressivos adultos tumores cerebrais primários ^1. Em anos recentes, tem havido um progresso substancial na compreensão dos mecanismos de invasão do tumor, e inoculação intracerebral directa de tumor proporciona a oportunidade de se observar o processo invasivo em um ambiente apropriado fisiologicamente ^2. No que diz respeito tumores cerebrais humanos estão em causa, os modelos ortotópicos actualmente disponíveis são estabelecidas, quer por injecção estereotáxica de suspensões de células ou implantação de um pedaço sólido de tumor através de um procedimento complicado craniotomia ^3. Na nossa técnica que colher células de cultura de tecidos para criar uma suspensão de células usadas para implante directamente para o cérebro. A duração da cirurgia é aproximadamente 30 minutos, e como o rato precisa de ser constante num plano cirúrgico, um anestésico injectável é usado. O rato é colocado em um jig estereotáxico feita por Stoetling (figura 1). À réer a área cirúrgica é limpo e preparado, é feita uma incisão; eo bregma está localizado para determinar a localização do craniotomia. A localização do craniotomia é de 2 mm para a direita e 1 mm rostral à bregma. A profundidade é de 3 mm da superfície do crânio, e as células são injectadas a uma taxa de 2 ul a cada 2 minutos. A pele é suturada com 5-0 PDS, e do rato é permitido para acordar em uma almofada de aquecimento. De nossa experiência, dependendo da linha celular, o tratamento pode ter lugar a partir de 7-10 dias após a cirurgia. A entrega da droga depende da composição de droga. Para o tratamento de radiação os ratos são anestesiados e colocados em um feito gabarito. Chumbo cobre o corpo do rato e expõe apenas o cérebro do rato. O estudo de tumorigénese ea avaliação de novas terapias para GBM requerem precisos e reprodutíveis cerebrais modelos animais de tumores. Assim, utilizar este modelo ortotópico cérebro para estudar a interacção do microambiente do cérebro e do tumor, para testar a effectiveness de diferentes agentes terapêuticos, com e sem radiação.

Protocol

I. preparação de células As células são crescidas até à confluência em DMEM com FBS 10% sobre um 80% 225 centímetros confluente 3 balão para cada 5 ratinhos a ser implantadas. Aspirar meios fora das células; lava-se com 10 ml de PBS sem cálcio ou magnésio. Aspirado PBS células fora. Trypsinize células com 3 ml de tripsina, esperar 10-15 min, e neutralizar a tripsina com 15 ml de meio. Pipetar todas as células e meios de comunicação em um cónico de 50…

Discussion

Gliomas malignos, como o glioblastoma multiforme, representam os mais comuns tumores cerebrais primários e têm um prognóstico sombrio ^4. Sobrevida de pacientes afetados por GBM permaneceu praticamente inalterada durante a última década (isto é, 9-12 meses após o diagnóstico), apesar dos avanços em cirurgia, radioterapia e quimioterapia ^5. As características de um modelo adequado para o estudo do tratamento glioma deve incluir uma localização do tumor reprodutível e crescimento das cél…

Materials

Lab Standard Stereotaxic Instrutment	Stoelting Mouse and Rat Adaptor
Betadine	100% EtOH
70% EtOH	50% Acetone
6″ Q-tips	Alcohol swabs
Hamilton syringe 80008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G/1″/PT3 needle	1 ml syringes
25G needles	Heating pad
Artificial Tears Ointment	Very fine tipped permanent marker