기계 군은 폐 개발 및 폐 부상에서 핵심적인 역할을한다. 여기서는 쥐 태아의 폐 유형 II 상피 세포 및 섬유아 세포를 분리하고 사용하여 기계적인 자극에 노출하는 방법을 설명<em> 체외에서</em> 시스템.
Abstract
반복적인 호흡과 같은 움직임 의해 유체 팽만에 의한 utero에서 생성된 기계적 세력은 정상 폐 개발을위한 중요합니다. 폐 개발의 핵심 구성 요소는 폐포 유형 II 상피 세포, 폐 계면 활성제의 주요 소스의 차별화입니다. 이러한 세포는 폐포 루멘, 호스트 방어 및 부상 수리에 유체 항상성에 참여합니다. 또한, 말초 폐 실질 조직 세포를 직접 출산 후 기계적 환기 중 과장 확대 해석에 노출됩니다. 그러나 폐암 세포가 폐 발달에 영향을 미치는하고 폐 손상을 촉진하기 위해 기계적인 자극을 감지하는 정확한 분자 및 세포 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다. 여기서는 쥐 태아의 폐가에서 2 형 세포와 섬유아 세포를 분리하기위한 간단하고 고순도 방법을 제공합니다. 그렇다면, 우리는에 기계적 힘을 시뮬레이션, 태아 세포에 기계적 자극을 제공하기 위해, 체외 시스템, Flexcell 스트레인 단위에 대해 설명태아의 폐 발달이나 폐 부상. 이 실험 시스템은 신축에 노출 태아의 폐 세포에서 분자 및 세포 메커니즘을 조사하기위한 훌륭한 도구를 제공합니다. 이 방법을 사용, 저희 연구실은 태아의 폐 발달과 폐 부상 mechanotransduction에 참여하는 여러 수용체 및 신호 전달 단백질을 찾아냈습니다.
Protocol
1. ECM 단백질과 플레이트의 코팅 멸균 조건에서 플레이트 당 차가운 멸균 1X PBS의 12 ML과 laminin 120 μg을 섞는다. Bioflex 치료 접시를 타고 각 잘으로 솔루션의 2ml를 추가 (laminin의 최종 농도 2 μg / cm 2). 또는 다른 ECM 단백질 같은 콜라겐-1로서 사용될 수 [10 μg / cm 2], fibronectin [5 μg / cm 2], vitronectin [0.5 μg / cm 2]이나 엘라스틴 [10 μg / cm 2]. 코팅 기?…
Discussion
본 원고에서는 태아의 유형 II 상피 세포 및 섬유아 세포를 분리하고 Flexcell의 위기 장치를 사용하여 기계적인 자극에 노출하는 방법을 설명합니다. 우리는 상피 세포의 분화 1,2을 평가하고 수용체와 스트레치 3-9 활성화 신호 전달 경로를 연구하기 위해이 기술을 사용해 왔습니다. 또한,이 방법은 또한 기계적 손상 10,11 의해 유도된 세포 반응을 조사하는 데 사용할 수 있?…
Wang, Y., Huang, Z., Nayak, P. S., Sanchez-Esteban, J. An Experimental System to Study Mechanotransduction in Fetal Lung Cells. J. Vis. Exp. (60), e3543, doi:10.3791/3543 (2012).