هذا البروتوكول فيديو يدل على العزلة والتوسع في مثل الخلايا الجذعية من مقطوعة جراحيا mutliforme ورم أرومي دبقي الإنسان (GBM) نسيج الورم باستخدام مقايسة الثقافة neurosphere الأسلوب.
وتم عزل الخلايا الجذعية مثل الأورام في مثل الثدي الرئة والبروستات والقولون والمخ. وثمة مسألة حاسمة في جميع هذه الأورام ، لا سيما في mutliforme ورم أرومي دبقي (GBM) ، هو تحديد وعزل الخلايا السرطانية السكان بدء (ق) للتحقيق في دورها في تشكيل الورم ، والتقدم ، وتكرار. والشروع في فهم ورم الخلية السكان توفر أدلة لإيجاد مناهج علاجية فعالة لهذه الاورام. وقد استخدمت مقايسة neurosphere (NSA) وذلك بسبب بساطته واستنساخ وطريقة اختيار العزلة ونشر العديد من هذه الخلايا السرطانية. هذا البروتوكول يوضح الأسلوب الثقافة neurosphere لعزل وتوسيع الخلايا الجذعية في مثل مقطوعة جراحيا الإنسان GBM نسيج الورم. الإجراءات تشمل الهضم الكيميائية الأولية والتفكك الميكانيكية للأنسجة الورم ، وبعد ذلك الطلاء الناتج تعليق خلية واحدة في الثقافة وكالة الامن القومي. بعد 7-10 أيام ، neurospheres الأساسي 150-2ويمكن ملاحظة 00 ميكرومتر في القطر ونحن على استعداد لمواصلة الركض والتوسع.
لعزل الخلايا الجذعية العصبية والسلف من الكبار والعقول العادية الجنين 1 ، 2 ، 3 ، 4 وكذلك ورم الخلايا الجذعية من الأنسجة مثل سرطان الرئة مثل 5 ، 6 البروستات والثدي والمخ 7 8 و 9 للمقايسة neurosphere كانت ، كثيرا ما تستخدم كوسيلة للاختيار. باستخدام هذا الاختبار البسيط واستنساخه ، يمكن للمرء أن إنشاء عدد غير محدد من الخلايا من أنسجة الورم التي تظهر مقطوعة خصائص مشابهة لالخلايا الجذعية الجسدية ؛ السابقين multipotency فيفو ، والقدرة على خلق أورام جديدة على الزرع ، وتجديد الذات. ويمكن استخدام هذه الخلايا لدراسة بيولوجيا الخلايا السرطانية الأساسية بما في ذلك الخلية الى خلية التفاعلات ، والتمايز ، والهجرة الغزو ، وموت الخلايا. بالإضافة إلى ذلك ، معزولة ورم الخلايا الجذعية مثل توفر أداة لا تقدر بثمن لدراسة كيفية تشكيل الأورام والتقدم والانتكاس ، وكذلك لكشف الآليات الكامنة الخلوية الناشئة التي يمكن في نهاية المطاف إلى تقديم رؤى علاجيةالخيارات.
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل عن طريق المنح المقدمة من مركز فلوريدا للبحوث استئصال ورم من الدماغ ؛ بريستون ألف ويلز الابن مركز لعلاج ورم في المخ.
Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments |
NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
**DNase I | Reagent | Roche | 104159 | |
**Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
No. 10 scalpel blade | Surgical tool | BD | 371610 | |
Petri Dish | Culture ware | BD Falcon | 353003 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050-10 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
* To make HEM, mix 1x10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
** To prepare trypsin inhibitor solution, first make 10 ml of DNase I solution (100 mg DNase dissolved in 100 ml of HEM) and then add 0.14 g of trypsin inhibitor to DNase solution and finally make the volume up to 1 Liter using HEM. Keep aliquots of the final products in -20°C freezer.