Summary

Superar la falta de respuesta en encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) cepas de ratones resistentes a través de transferencia adoptiva y la estimulación antigénica

Published: April 09, 2012
doi:

Summary

Ciertas cepas de ratón son capaces de resistir la inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) con proteína básica de mielina. Aquí se describe es un protocolo de inmunización simple que invierte la falta de respuesta e induce la enfermedad paralítica en varios típicas manchas de EAE de ratón resistentes.

Abstract

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es una enfermedad inflamatoria del sistema nervioso central (SNC) y se ha utilizado como un modelo animal para el estudio de la enfermedad desmielinizante humana, la esclerosis múltiple (MS). EAE se caracteriza por la infiltración patológica de células mononucleares en el SNC y por la manifestación clínica de la enfermedad paralítica. Similar a la EM, EAE es también bajo control genético en que ciertas cepas de ratón son susceptibles a la inducción de la enfermedad, mientras que otros son resistentes. Por lo general, C57BL / 6 (H-2 b) los ratones inmunizados con la proteína básica de mielina (MBP) no presenta signos de parálisis. Esta falta de respuesta no es ciertamente debido a defectos en el procesamiento de antígenos o la presentación de antígenos de MBP, como un protocolo experimental descrito aquí se han utilizado para inducir EAE severa en ratones C57BL / 6, así como otras cepas de ratón reputadas resistentes. Además, encefalitógenas clones de células T de los ratones C57BL / 6 y ratones Balb / c reactivas a MBP había sido éxitocompletamente aislado y propagado.

El protocolo experimental implica el uso de un sistema celular en el que la transferencia adoptiva MBP-cebado (200 ug / ratón) C57BL / 6 donantes células de ganglios linfáticos se aislaron y cultivaron durante cinco días con el antígeno para ampliar el grupo de células T específicas de MBP. Al final del período de cultivo, 50 millones de células viables se transfieren a ingenuos receptores singénicos a través de la vena de la cola. Los ratones receptores así tratados no suelen desarrollar EAE, reafirmando así su condición resistentes, y pueden permanecer normal por tiempo indefinido. Diez días después de la transferencia de células, los ratones receptores tienen el desafío de adyuvante completo de Freund (CFA)-MBP emulsionada en cuatro sitios en los flancos. EAE severa comienza a desarrollarse en estos ratones de diez a catorce días después del desafío. Los resultados mostraron que la inducción de la enfermedad fue específico antigénica como desafío con antígenos irrelevantes no indujo signos clínicos de enfermedad. Significativamente, una titulación de la dosis de antígeno utilizado paradesafiar los ratones receptores mostró que podría ser tan baja como 5 ug / ratón. Además, un estudio cinético de la temporización de una estimulación antigénica mostró que desafío para inducir la enfermedad fue eficaz tan pronto como 5 desafío antigénico días después y mientras más de 445 días post desafío antigénico. Estos datos apuntan claramente hacia la participación de una "larga vida" población de células T en el mantenimiento de la falta de respuesta. La participación de las células T reguladoras (Tregs) en este sistema no está definido.

Protocol

1. Preparación CFA-antígeno emulsionado Disolver cobaya MBP (preparado de acuerdo con el método de Swanborg1 y se almacena en forma liofilizada a 4 ° C) en solución tampón de fosfato (PBS) a una concentración de 2 mg / ml. Si sintetizados péptidos MBP (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 se utilizan, preparar una solución de 2 mg / ml. Elaborar una cantidad apropiada de solución de antígeno (0,1 ml por ratón para ser vacunados) en una jeringa de vidrio con luer-lok. E…

Discussion

Los estudios de la EAE en ratones a menudo utilizan los neuroantigens, la proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipídica (PLP) o las proteínas de mielina de oligodendrocitos (MOG). Estudios anteriores utilizan sobre todo MBP. PLP estimula respuestas fuertes y consistentes de los ratones SJL. Más recientemente, MOG es el neuroantigen común usado porque ratones B6 son susceptibles a la inducción de la enfermedad con este antígeno. Muchas de las cepas de ratón de genes específicos están en el fondo B…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Apoyado en parte por subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud (R01 NS37253 y NS055167 N01) y la Sociedad Nacional de Esclerosis Múltiple (RG 3288-A6).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Guinea pig spinal cords Rockland Immuno-chemicals, Inc.
Gilbertsville, PA 19525
www.rockland-inc.com
GP-T065 frozen
Freund’s Adjuvant, complete H37Ra Difco Laboratories
Detroit, MI
231131
Multifit interchange-able syringe B-D
www.bd.com/us
512133
RPMI 1640 Mediatech Inc.
Manassas, VA
www.cellgro.com
10-040-CM
OVA Sigma-Aldrich
www.sigmaaldrich.com
A5503
Mice Jackson Laboratory
Bar Harbor, Maine
B6 mice: 0000664

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Cite This Article
Shaw, M. K., Zhao, X., Tse, H. Y. Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge. J. Vis. Exp. (62), e3778, doi:10.3791/3778 (2012).

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