Преодоление невосприимчивости в экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) штаммов мыши по усыновлению и передачи Антигенная вызов
Summary
Некоторые штаммы мыши способны противостоять индукции экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) с белком миелина основной. Описанный здесь простой протокол иммунизации, что меняет и вызывает невосприимчивость паралитического заболевания в нескольких типичных EAE стойкие загрязнения мыши.
Abstract
Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) представляет собой воспалительное заболевание центральной нервной системы (ЦНС) и был использован в качестве животной модели для изучения человеческих болезней демиелинизирующей, рассеянный склероз (РС). EAE характеризуется патологической инфильтрации мононуклеарных клеток в центральной нервной системе и клиническими проявлениями паралитического заболевания. Как и в MS, EAE также находится под генетическим контролем в том, что некоторые штаммы мыши восприимчивы к болезни индукции, а другие являются устойчивыми. Как правило, C57BL / 6 (H-2, б) мышей, иммунизированных белком миелина основной (МБП) не развиваются паралитические знаков. Это отсутствие реакции, конечно, не из-за дефектов в обработке антигена или антигенов в MBP, как экспериментальный протокол, описанный здесь был использован, чтобы вызвать серьезный EAE в C57BL / 6, а также других известных штаммов мыши. Кроме того, encephalitogenic Т-клеток клонов из C57BL / 6 и BALB / C мышей реагирует на MBP был успехполностью изолирован и распространяются.
Экспериментальный протокол предполагает использование сотовой приемной системы денежных переводов, в которых MBP-загрунтовать (200 мкг / мышь) C57BL / 6 донорских клеток лимфатических узлов выделяют и культивируют в течение пяти дней с антигеном расширить пул MBP конкретных Т-клеток. В конце периода культивирования, 50 млн. жизнеспособных клеток передаются в наивных сингенных получателям через хвостовую вену. Получатель мышей таким образом рассматриваться как правило, не развиваются EAE, тем самым подтвердив их устойчивый статус, и они могут оставаться нормальной на неопределенный срок. Через десять дней после передачи ячейки, получатель мышей заражали Фрейнда адъювантной (CFA), эмульгированных MBP в четырех местах в бока. Тяжелые EAE начинает развиваться у этих мышей от десяти до четырнадцати дней после заражения. Результаты показали, что индукция болезнь антигенной конкретные задачи, как, не относящимися к антигенам не вызывает клинических проявлений болезни. Примечательно, что титрования дозы антигена используется длявызов получателя мышах показали, что это может быть как 5 мкг / мышь. Кроме того, кинетические исследования о сроках антигенной проблемы показал, что задача, чтобы вызвать заболевание было эффективным, как уже 5 дней после заражения и антигенные тех пор, пока на 445 дней после антигенной проблемы. Эти данные убедительно указывают на участие "долгоживущих" Т клеточной популяции в поддержании невосприимчивость. Участие регуляторных Т-клеток (Tregs) в этой системе не определен.
Protocol
Discussion
Исследования EAE у мышей часто используют neuroantigens, основного белка миелина (ОБМ), proteolipid белок (ПЛП) или миелин олигодендроцитов белка (МНГ). Более ранние исследования в основном используется MBP. ПЛП стимулирует сильные и последовательные ответы SJL мышей. Совсем недавно, MOG является общим neur…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
При частичной поддержке грантов от Национального института здоровья (R01 NS37253 и N01 NS055167) и Национальное общество рассеянного склероза (RG 3288-A6).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
References
- Swanborg, R. H., Sabato, G. D. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
- McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
- Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
- Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
- Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
- Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis – susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
- Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
- Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
- Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
- Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
- Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).
