Summary

A saliva, glândula salivar, e Coleta de hemolinfa de carrapatos Ixodes scapularis

Published: February 21, 2012
doi:

Summary

A coleta de hemolinfa do carrapato infectado, glândulas salivares e saliva é importante estudar como a transmitida por carrapatos patógenos causam doenças. Neste protocolo, demonstramos como coletar glândulas salivares e hemolinfa de alimentação<em> Ixodes scapularis</em> Ninfas. Nós também demonstramos a coleta da saliva da fêmea<em> I. scapularis</em> Adultos.

Abstract

Carrapatos são encontrados em todo o mundo e afligem os seres humanos com muitas doenças transmitidas por carrapatos. Os carrapatos são vetores de patógenos que causam a doença de Lyme e transmitida por carrapatos febre recorrente (Borrelia spp.), Febre maculosa (Rickettsia rickettsii), erliquiose (Ehrlichia chaffeensis e E. equi), anaplasmose (Anaplasma phagocytophilum), encefalite (tick- vírus da encefalite transmitida), babesiose (Babesia spp.), Colorado febre do carrapato (Coltivirus), e tularemia (Francisella tularensis) 1-8. Para ser adequadamente transmitida para o anfitrião destes agentes infecciosos diferencialmente regulam a expressão gênica, interagir com as proteínas de carrapatos, e migram através do carrapato 3,9-13. Por exemplo, o agente da doença de Lyme, Borrelia burgdorferi, adapta-se através da expressão diferencial de genes para as fases de festa e fome de ciclo enzoótico do carrapato 14,15. Além disso, como carrapatos um Ixodes consome umafarinha de sangue Borrelia replicar e migrar do intestino para a hemocele, onde eles viajam para as glândulas salivares e são transmitidos para o host com a saliva expelida 9,16-19.

Como um carrapato se alimenta do hospedeiro geralmente responde com uma resposta hemostática e inata imunológico forte 11,13,20-22. Apesar destas respostas de acolhimento, I. scapularis pode se alimentar por vários dias porque a saliva do carrapato contém proteínas que são imunomoduladores, agentes líticos, anticoagulantes, e fibrinolysins para ajudar o carrapato alimentando 3,11,20,21,23. As atividades imunomoduladoras possuídos pela saliva do carrapato ou extrato de glândula salivar (SGE) facilitar a transmissão, a proliferação e disseminação de inúmeros carrapatos patógenos 3,20,24-27. Para entender melhor como carrapatos agentes infecciosos causam a doença é essencial para dissecar alimentando ativamente carrapatos e coletar a saliva do carrapato. Este protocolo de vídeo demonstra técnicas de dissecação paraa recolha de hemolinfa e à remoção das glândulas salivares de alimentação activamente I. scapularis ninfas após 48 e 72 horas pós posicionamento do mouse. Nós também demonstramos a coleta da saliva de uma fêmea adulta I. carrapato scapularis.

Protocol

1. Coleta de hemolinfa para a preparação de slides (Filme 1) Remover suavemente activamente carrapatos de alimentação a partir de um animal e em lugar de peróxido de hidrogénio a 3% tópica durante 5 minutos e, em seguida, em etanol a 70% durante 10 minutos à superfície esterilizar. Com uma caneta pap desenhar um círculo sobre uma lâmina de microscópio com revestimento de silano e coloque o carrapato dentro do círculo caneta pap. Silano lâminas reve…

Discussion

A coleta de hemolinfa do carrapato, glândulas salivares e saliva é importante no estudo da transmissão de patógenos transmitida por carrapatos, a divulgação, prevalência, proliferação e persistência, tanto carrapato e do exército 6,11-13,20,23,29. Existem várias maneiras de dissecar um carrapato 30,31. No entanto, ao coletar as glândulas salivares é fundamental para dissecar o carrapato corretamente para as glândulas salivares não são rompidas ou perdido em restos do carrapato. Uma…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os autores gostariam de agradecer à Divisão de Vector Borne-Doenças Animais Branch Resources, especificamente Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O'Brien, e John Liddell para seu cuidado e manutenção dos ratos e coelhos. Gostaríamos também de agradecer a Amy Ullmann, Theresa Russell, e Barbara J. Johnson para suas contribuições para este manuscrito. Finalmente, gostaríamos de reconhecer Alissa Eckert no Gabinete do Diretor Adjunto de Comunicação do CDC para produzir as ilustrações gráficas e Judy Lavelle para dirigir todos os assuntos legais relacionados com a filmagem deste manuscrito.

Materials

Reagent Company Catalogue Number
Hydrogen peroxide Fisher H312-500
Ethanol Acros 61509-5000
PBS Boston Bioproducts BM-2205
Dumont Fine forceps (3C) Fisher NC9906085
Silane treated microscope slides Bioworld 42763007-1
Pap pen Bioworld 21750008-1
Super frost plus microscope slides Fisher 12-550-18
Pilocarpine Sigma P6503-5G
Protease inhibitor cocktail Sigma P2714
#11 disposable scalpel Feather 2975#11
Nontoxic modeling clay Fisher S17307
Capillary tubes Chase scientific Glass, inc 40A502

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Patton, T. G., Dietrich, G., Brandt, K., Dolan, M. C., Piesman, J., Gilmore Jr., R. D. Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks. J. Vis. Exp. (60), e3894, doi:10.3791/3894 (2012).

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