צמר זכוכית מסננים וירוסים waterborne ריכוז פתוגנים zoonotic חקלאיים
Summary
צמר זכוכית מסננים שימשו לרכז וירוסים waterborne על ידי מספר קבוצות מחקר ברחבי העולם. כאן אנו מצביעים על גישה פשוטה לבניית צמר זכוכית מסננים ולהפגין המסננים הם גם יעילים ריכוז waterborne ויראליים, גורמי מחלה חיידקיים protozoan.
Abstract
הצעד הראשון מפתח בהערכת רמות פתוגן במים מזוהמים חשד הוא ריכוז. שיטות הריכוז נוטים להיות ספציפית עבור קבוצת פתוגן מסוים, למשל ארה"ב הסוכנות להגנת הסביבה שיטת 1623 עבור Giardia ו Cryptosporidium 1, כלומר מספר שיטות נדרשים אם תוכנית דגימה מכוונת יותר מקבוצה אחת הפתוגן. עוד חיסרון של השיטות הקיימות הוא הציוד יכול להיות מסובך ויקר, למשל שיטת VIRADEL עם מסנן את מחסנית 1MDS לריכוז וירוסים 2. במאמר זה נתאר כיצד לבנות צמר זכוכית מסננים לריכוז פתוגנים waterborne. לאחר elution מסנן, תרכיז הוא נוח לשלב ריכוז 2, כגון צנטריפוגה, ואחריו זיהוי ספירה הפתוגן ועל ידי שיטות התרבות או המולקולרית. מסננים את מספר יתרונות. בנייה קלה את המסננים ניתן לבנות עלניו יורק גודל הדגימה בדרישות ספציפיות. החלקים סינון זולים, כך שניתן לאסוף מספר רב של דגימות ללא קשות להשפיע על תקציב הפרויקט. כרכים מדגם גדול (100s של עד 1,000 ל ') יכול להיות מרוכזים בהתאם בשיעור של סתימת מן העכירות המדגם. המסננים הם ניידים מאוד עם ציוד מינימלי, כגון משאבה מד זרימת, הם יכולים להיות מיושם בשטח של הדגימה שתייה המוגמר, מים עיליים, מי תהום, נגר חקלאי ו. לבסוף, צמר זכוכית סינון יעיל לרכז מגוון סוגי פתוגן זאת רק שיטה אחת היא הצורך. כאן אנו מדווחים על יעילות הסינון ריכוז enterovirus האדם waterborne, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, וירוס שפעת העופות.
Protocol
Discussion
צמר זכוכית מסנני כבר בשימוש על ידי צוותי מחקר מספר 3,5,6 להתרכז וירוסים אנטרי אדם ממגוון רחב של מקורות המים כגון מי שתייה סיים 7, 8,9 מי תהום, מים עיליים 10, מי ים 11, שפכים 12, ו נגר חקלאי 13. כאן אנו מדווחים על המסננים הם גם יעילים ריכוז נגיף ש…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים ויליאם ט 'אקרט ל המספרת וידאו. פיתוח פרוטוקול צמר זכוכית היה חלק מים ויסקונסין ניסיון הבריאות לסיכונים אנטרי (WAHTER לימוד), במימון המשרד לאיכות הסביבה בארה"ב STAR גרנט R831630. דגימות אלסקה נאספו על ידי א 'ריבס, א ריימי, ו-B Meixell עם תמיכה כספית USGS. כל שימוש בשמות המסחר, המוצר או החברה הוא למטרות תיאוריות בלבד, אינה מעידה על אישור על ידי ממשלת ארה"ב.
Materials
| Name of reagent or item | Company | Catalogue number |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic |
Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | The Clorox Co. | |
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific | S 475-212 |
| Beef extract, desiccated | Becton, Dickinson and Company | 211520 |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 |
| Oiled sodocalcic glass wool
Or R-11 unfaced fiberglass insulation |
Isover
Johns Manville |
Bourre 725 QN |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting | xN4510 |
| 2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger | 6MW35 |
| 2″ Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 |
| Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) | US Plastic Corp. | 62178 |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific | 03-313-4F |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific | NC9661991 |
| pH strips | Whatman | 2614 991 |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
References
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
- Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
- Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
- Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
- Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
- Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
- Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
- Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
- van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
- Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
- Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
- Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
- Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
- Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).
