Summary

Vidro Filtros de lã para a concentração de vírus e transmitidas pela água Agrícolas patógenos zoonóticos

Published: March 03, 2012
doi:

Summary

Os filtros de lã de vidro têm sido utilizados para concentrar os vírus pela água por um número de grupos de pesquisa em todo o mundo. Aqui, mostramos uma abordagem simples para a construção de filtros de lã de vidro e demonstrar os filtros são também eficazes na concentração waterborne virais, agentes patogénicos bacterianos e protozoários.

Abstract

O primeiro passo fundamental na avaliação de níveis de patógenos em água contaminada suspeita é a concentração. Métodos de concentração tendem a ser específicas para um determinado grupo patógeno, por exemplo Ambiental dos EUA Método Agência de Protecção 1623 para Giardia e Cryptosporidium 1, o que significa que vários métodos são necessários se o programa de amostragem é a segmentação mais do que um grupo patógeno. Outra desvantagem dos métodos actuais é o equipamento pode ser complicado e caro, por exemplo, o método VIRADEL com o filtro de cartucho para a concentração de vírus 1MDS 2. Neste artigo vamos descrever como construir filtros de lã de vidro para a concentração de agentes patogênicos. Após eluição do filtro, o concentrado é passível de um passo de concentração em segundo lugar, tal como centrifugação, seguido por detecção de agentes patogénicos e enumeração por métodos de cultura ou molecular. Os filtros têm várias vantagens. A construção é fácil e os filtros podem ser construídos para umny tamanho para atender aos requisitos específicos de amostragem. As peças de filtro são baratos, tornando possível a recolha de um grande número de amostras, sem que prejudica gravemente a um orçamento do projecto. Grandes volumes de amostra (100S a 1.000 s L) pode ser concentrada, dependendo da taxa de entupimento de turvação da amostra. Os filtros são altamente portátil e com o mínimo de equipamento, tais como uma bomba e medidor de fluxo, eles podem ser implementados no campo para a amostragem de água potável acabado, água de superfície, a água subterrânea, e do escoamento agrícola. Por último, o vidro de filtração lã é eficaz para a concentração de uma variedade de tipos de organismos patogénicos para que apenas um método é necessário. Aqui nós relatamos sobre a eficácia do filtro em concentrar enterovirus humano por via aquática, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum e vírus da gripe aviária.

Protocol

1. Preparação da Lã de Vidro Antes e depois fazendo com que cada lote de filtros, esterilizar a área de trabalho com uma solução de lixívia a 10%. Coloque luvas e jaleco. Esterilizar um balde em autoclave a 121 psi e 15 ° C durante pelo menos 20 minutos. Coloque a lã de vidro no balde estéril. Saturar a lã de vidro com água de osmose reversa e deixe de molho durante 15 minutos. Escorra a água de osmose reversa do balde. Saturar a lã de vidro com 1 M de HCl…

Discussion

Os filtros de lã de vidro têm sido usadas por vários grupos de pesquisa 3,5,6 a concentrar-se humanos vírus entéricos de uma variedade de fontes de água, tais como água potável terminado 7, a água subterrânea 8,9, água de superfície 10, a água do mar 11, as águas residuais 12, e escoamento agrícola 13. Relatamos aqui os filtros são também eficazes na concentração de vírus de influenza aviária, bem como os agentes patogénic…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Agradecemos William T. Eckert para narrar o vídeo. Desenvolvimento do protocolo de lã de vidro fez parte da água Wisconsin e Julgamento de Saúde para Riscos entéricos (WAHTER Study), financiado pela EPA dos EUA ESTRELA Grant R831630. Alaska amostras foram coletadas por A. Reeves, A. Ramey e Meixell B. com apoio financeiro do USGS. Qualquer utilização dos nomes de comércio, produto ou empresa é apenas para fins descritivos e não implica o endosso pelo governo dos EUA.

Materials

Name of reagent or item Company Catalogue number
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline
Sodium chloride
Potassium phosphate-dibasic
Potassium phosphate-monobasic

Fisher Scientific
Fisher Scientific
Fisher Scientific

BP358-212
BP363-500
BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach The Clorox Co.  
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated Becton, Dickinson and Company 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool
Or
R-11 unfaced fiberglass insulation
Isover

Johns Manville
Bourre 725 QN


Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2″ Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

References

  1. US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
  2. Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
  3. Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
  4. Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
  5. Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
  6. Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
  7. Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
  8. Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
  9. Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
  10. van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
  11. Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
  12. Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
  13. Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
  14. Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
  15. Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).

Play Video

Cite This Article
Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

View Video