Glass Ull Filtre for å konsentrere Vanntynnbare Virus og landbruksprodukter zoonotiske patogener
Summary
Glassull filtre har blitt brukt til å konsentrere vannbårne virus av en rekke forskningsgrupper rundt om i verden. Her viser vi en enkel tilnærming for å bygge glass ull filtre og demonstrere filtrene er også effektive i å konsentrere vannbårne virus-, bakterie-og protozo patogener.
Abstract
Nøkkelen første skritt i å vurdere patogen nivåer i mistanke forurenset vann er konsentrasjonen. Konsentrasjon metoder tendens til å være spesifikk for en bestemt patogen gruppe, for eksempel US Environmental Protection Agency Method 1623 for Giardia og Cryptosporidium en, noe som betyr flere metoder er nødvendig dersom prøvetaking programmet er rettet mot mer enn en patogen gruppe. En annen ulempe med dagens metoder er utstyret kan være komplisert og dyrt, for eksempel VIRADEL metoden med 1MDS patron filter for å konsentrere virus to. I denne artikkelen beskriver vi hvordan du konstruere glassull filtre for å konsentrere vannbårne patogener. Etter filter eluering, er konsentratet mottagelig for en andre konsentrasjon skritt, slik som sentrifugering, etterfulgt av patogen Påvisning og telling av kulturelle eller molekylære metoder. Filtrene har flere fordeler. Konstruksjonen er enkel og filtrene kan bygges til enNY størrelse for å møte spesifikke prøvetaking krav. Filteret deler er billig, noe som gjør det mulig å samle et stort antall prøver uten alvorlig påvirker et prosjekt budsjett. Store prøvevolumer (100s til 1000 L) kan være konsentrert avhengig av takten for tilstopping fra utvalget turbiditet. Filtrene er svært portabel og med minimal utstyr, for eksempel en pumpe og strømningsmåler, kan de implementeres i feltet for prøvetaking ferdig drikkevann, overflatevann, grunnvann, og landbruket avrenning. Endelig er glassull filtrering effektiv for å konsentrere en rekke patogene typer slik at bare én metode er nødvendig. Her rapporterer vi om filter effektivitet i å konsentrere vannbåren human enterovirus, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, og fugleinfluensa-viruset.
Protocol
Discussion
Glassull filtre har vært brukt av flere forskergrupper 3,5,6 å konsentrere menneskelige enteriske virus fra en rekke vannkilder som ferdig drikkevann 7, 8,9 grunnvann, overflatevann 10, sjø 11 vann, 12 avløpsvann, og landbruket avrenning 13. Her rapporterer vi er filtrene også effektive i å konsentrere aviær influensa virus samt bakterielle og protozo patogener Salmonella enterica (serovar Typhimurium) og Cryptosporidium parvum, h…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi takker William T. Eckert for narrating videoen. Utvikling av glassull protokollen var en del av Wisconsin vann og helse Trial for enteriske risikoer (WAHTER Study), finansiert av US EPA STAR Grant R831630. Alaska prøver ble samlet av A. Reeves, A. Ramey, og B. Meixell med økonomisk støtte fra USGS. All bruk av handel, produkt eller firma navn er for beskrivende kun og innebærer ikke godkjenning av amerikanske myndigheter.
Materials
| Name of reagent or item | Company | Catalogue number |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic |
Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | The Clorox Co. | |
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific | S 475-212 |
| Beef extract, desiccated | Becton, Dickinson and Company | 211520 |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 |
| Oiled sodocalcic glass wool
Or R-11 unfaced fiberglass insulation |
Isover
Johns Manville |
Bourre 725 QN |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting | xN4510 |
| 2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger | 6MW35 |
| 2″ Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 |
| Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) | US Plastic Corp. | 62178 |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific | 03-313-4F |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific | NC9661991 |
| pH strips | Whatman | 2614 991 |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
References
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
- Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
- Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
- Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
- Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
- Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
- Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
- Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
- van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
- Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
- Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
- Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
- Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
- Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).
