우리는 마우스 태아에 bioactive 대리인의 intratracheal 관리에 대한 새로운 수술 방법을 개발했습니다. 배달 경로는 일반적으로 사용되는 내부 - 양수 주입보다 태아 마우스 폐를 타겟으로 더 효율적입니다. 이 절차는 마우스 모델에서 설명되지 않은 날짜로되어 있습니다.
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방법 논문
태아 마우스 모델에서 Bioactive 에이전트의 Intratracheal 관리를위한 소설 외과 접근
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
세포, 유전자 또는 pharmacologic 요원이 태아 폐 배달 유전자와 획득 질병의 다양한 새로운 치료 전략을위한 기반을 제공 할 수 있습니다. 이외에도 단기 유전자 발현이나 약리 개입이 치료 효과를 달성하기에 충분한 전달 유전자, 여러 가지 비 상속 perinatal 조건의 장기 표현에 대한 요구가있는 선천성 또는 상속 이상에서이에 대한 미래의 징후로 간주됩니다 접근 방식의 종류. 단기 태아 치료의 응용 프로그램에 대한 후보 질병은 신생아 호흡 곤란 증후군의 1,2 또는 신생아 폐 3 hyperoxic 부상의 원인이 계면 활성제 단백질 B의 과도 신생아 결핍이 될 수 있습니다. 영구 치료 교정하기위한 후보 질병은 낭포 성 섬유증 (CF) 4, 계면 활성제의 결함 5 α1-antitrypsin 결핍증 (6)의 유전자 변형입니다. <P 클래스는 = "jove_content"> 일반적으로, 태아 유전자 치료의 중요한 장점은 따라서 개인에 치유 할 수없는 손상을 방지, 환자의 임상 발현 이전에 또는 초기 개발에 치료 개입을 시작하는 능력입니다. 태아에 더 효율적인 유전자 나 줄기 세포 전송을 허용 할 수 성인 기관, 비교 또한, 태아 기관은 증가 세포 증식 속도를 갖추고 있습니다. 또한, 자궁 유전자 전달에 개인의 면역 체계가 완전히 성숙하지 않을 때 수행됩니다. 따라서, 올바른 버전이 아닌 기능이나 결석 단백질의 heterologous 셀이나 보완의 이식은 최근 세포와 유전자를 모두 치료 7의 경우로 입증 된 셀, 벡터 또는 transgene 제품에 면역 sensitization을 야기해서는 안됩니다 .
본 연구에서, 우리는 직접 마우스 m의 태아 기관을 타겟팅 할 가능성을 조사odel. 이 절차는 토끼와 양 팔, 심지어는 임상 설정 9에서와 같이 큰 동물 모델에서 사용하지만, 마우스 모델에서 이전에 수행되지 날짜로되어 있습니다. 등 CF와 같은 유전 질환에 대한 태아 유전자 치료의 가능성을 연구 할 때 마우스 모델 때문에 다른 유전자 변형 마우스 변종, 잘 문서화 embryogenesis와 태아 개발, 덜 엄격한의 넓은 가용성의 증명 개념 첫째로 매우 유용합니다 윤리 규정, 짧은 회임과 대형 쓰레기 크기입니다.
다른 액세스 경로가 간 양수 주입 10-12, 난황 주머니 선박 15,16 또는 배꼽 정맥 17로 (초음파 - 가이드) intrapulmonary 주입 13,14 및 정맥 주사 관리를 포함하여 태아 쥐 폐를 타겟으로 설명되어 있습니다. 우리 소설 수술은 직접 수있는 태아 마우스 기관으로 선택하는 에이전트를 주입 연구자 수기존의 기술 18보다기도에 더 효율적 제공을위한.
프로토콜
1. 원하는 임신 스테이지을 구하는 마우스의 결합
시간 친구 임신 NMRI 마우스를 그들 수술시 임신 18일 (E18) (총 회임 E19.5) 것을. 이전 수술과 이후 그들은 상온 물과 음식을 무료로 이용할 수있는 일반적인 일광에서 필터 상단 케이지에 자리 잡고 있습니다.
2. 태아 Intratracheal (IT) 주입 (그림 1)
- 먼저 1.5 L / 분에서 O 2의 혼합에 isoflurane 1.5 %로 전신 마취에 임신 NMRI 마우스를 제출합니다. isoflurane의 수준은 마우스의 연령과 변형에 따라 다르지만, 일반적으로 isoflurane은 마취 상태에서 동물을 삽입하는 수준에 있어야합니다. 다음 중 체온을 유지하기 위해 (37 ° C) 가열 패드에 임신 마우스를 넣어 수술.
- 전체 외과 수술은 두 외과 의사에 의해 수행됩니다. 한 외과 의사는 임신 마우스와 일의 후속 노출 절개를 수행합니다intratracheal 분사에 대한 전자 태아. 두 번째 외과 의사가 태아 intratracheal 주사 자체를 수행합니다. 수술 절차는 무균 기기 및 무균 기술을 사용하여 수행됩니다.
- povidone 요오드화물과 ....
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토론
중요 단계
- 그들은 새끼의 풍부한 수 (평균 쓰레기 크기 14.4 ± 1.8, 자신의 데이터)를 가지고 있기 때문에 우리가 함께 작동하도록 선택 마우스 스트레인 NMRI 마우스입니다 잘 개입을 용인하고 좋은 어머니의 특성을 갖추고 있습니다.
- 만 외상을 유발하지 않고 거의 불가능 그렇지 않으면 재배치, 태아 머리가 아닌 어깨를 노출 원하는대로 자궁 벽과 태아 멤브레인을 통해 지갑 문자열을 배치하는 것은 중요한 단계입니다.
- 태아 머리의 최적의 위치는 큰 혈관 (목 혈관) 기관과 병렬 실행 방지 있도록 하위 정확히 기관 위의 절개를 할 필수적입니다되었다.
- 그것은 시각적으로 잘못된 주사를 피하기 위해 수술 현미경으로 태아 기관에 바늘의 삽입을 수행하는 것이 중요합니다.
- 외상을 유발하지 않고 자궁 주머니에 태아 머리를 교체하면 같은 중요내부 - 자궁 또는 출생 후의 사망률을 증가 태아 머리를, 부상 방지하고 싶습니다.
- 이 부정적인 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
MC와 AVdP는 플랜더스의 과학 기술 (IWT-Vlaanderen)을 통해 혁신의 추진 연구소에서 보조금에 의해 지원 박사 동문 있습니다. JT는 UZ Leuven에서 파트 타임 임상 연구 휄로 십 (KOOR)를 보유하고 있습니다. DV는 구 Leuven, DBOF/10/062의 교부금으로 지원하는 박사 동료입니다. MMdC는 Conselho Nacional 드 Pesquisa 전자 Desenvolvimento (CNPq)와 에라스무스 (Erasmus) Mundus의 교부금으로 지원하는 박사 동료입니다. 연구는 EC 부여 DIMI (LSHB-CT-2005-512146)와 구 Leuven에서 생체 분자 이미징 연구 그룹 (IMIR)에 의해, IWT-Vlaanderen로 운영되었습니다. 우리는 rAAV 벡터 생산을위한 플라스미드 AAV6.2 포장의이 같은 선물 제임스 M. 윌슨에 의해 설립 UPenn 벡터 코어를 인정하고 싶습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 코멘트 (선택 사항) |
| NMRI 마우스 | 비어 르 Genest 세인트 섬, 프랑스 | ||
| Isoflurane | Isoba, Intervet / Schering-북두칠성 동물 건강, 밀턴 케인즈, 영국 | ||
| Prolene 6-0 | Ethicon, Groot Bijgaarden, 벨기에 | ||
| Vicryl 5-0 | Ethicon, Groot Bijgaarden, 벨기에 | ||
| 50 μl 해밀턴 유리 주사기, 모델 1710.5 TLLX SYR | 해밀턴, 리노, 네바다, 미국 | 5495-20 | |
| 30g의 날카로운 바늘 | 해밀턴, 리노, 네바다, 미국 | 7762-03 | |
| 2퍼센트 xylocaine | 아스트라 제 네 카, Zoetermeer, 네덜란드 |
참고문헌
- Willson, D. F., Notter, R. H. The future of exogenous surfactant therapy. Respir. Care. 56, 1369-1388 (2011).
- Abdel-Latif, M. E., Osborn, D. A. Intratracheal Clara cell secretory protein (CCSP) administration in preterm infa....
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재인쇄 및 허가
