Summary

Гранулоцитов зависит от аутоантител вызванных кожи пузырей

Published: October 12, 2012
doi:

Summary

В животном модели, описанной в нашей нынешней работы, очищенный IgG антитела против участке 200 аминокислот (аа 757-967) коллагена VII вводят повторно мышам воспроизводя пузырей фенотипа, а также гисто-и иммунопатологические особенности, характерные для человека эпидермолиз буллезной acquisita (EBA)<sup> 1</sup>.

Abstract

Аутоиммунные явления происходят у здоровых людей, но когда аутотолерантность не удается, аутоиммунный ответ может привести к конкретной патологии. По Witebsky постулатов, один из критериев в диагностике заболевания, аутоиммунные является воспроизводство заболевания у подопытных животных по пассивной передачи антител. Для эпидермолиз буллезной acquisita (EBA), прототипического орган-специфических аутоиммунных заболеваний кожи и слизистых оболочек, несколько экспериментальных моделей были недавно установлены. В животном модели, описанной в нашей нынешней работы, очищенный IgG антитела против участке 200 аминокислот (аа 757-967) коллагена VII вводят повторно мышам воспроизводя пузырей фенотипа, а также гисто-и иммунопатологические особенности, характерные для человека EBA 1. Полномасштабную распространенное заболевание обычно наблюдается через 5-6 дней после первой инъекции и степени заболевания коррелирует с дозой вводится сollagen VII конкретных IgG. Повреждения ткани (образование пузырей) в экспериментальном ЕВА, в зависимости от набора и активацию гранулоцитов тканью связанных аутоантител 2, -4. Таким образом, эта модель позволяет для вскрытия гранулоцитов зависит от воспалительных пути, участвующие в аутоиммунного повреждения тканей, так как модель воспроизводит только Т-клеток независимых этапа эфферентной аутоиммунный ответ. Кроме того, его значение указывается ряд исследований, демонстрирующих блистерная вызывающие потенциал аутоантител в естественных условиях и исследования механизма формирования пузыря в 1,3 EBA, -6. Наконец, эта модель будет в значительной степени способствовать развитию новых противовоспалительной терапии в аутоантител-индуцированных заболеваний. В целом, пассивная модель животного передаче EBA является доступным и поучительные модели заболевания и поможет исследователям анализировать не только EBA патогенеза, но ответить на фундаментальные биологически и клиническисущественные вопросы аутоиммунных заболеваний.

Protocol

1. Подготовка патогенные антитела Примечание: Очистка и концентрация антител должны быть выполнены в тот же день, как антитела не будут храниться в 0,1 М глицин, рН 2,5-3 (буфера элюирования) в течение ночи (ON). Affinity очистки IgG: используйте 25 мл иммунной сыворотки …

Representative Results

Пассивный перенос антигена конкретных результатов антител в полномасштабную болезни у мышей, напоминающее на клинических, гистологических и иммунопатологические уровни человеческого EBA. Пузыри, корок, эрозий и алопеция развивается на уши, мордочка, лапы, ноги, спину и вокруг глаз мыше…

Discussion

Пассивного переноса антител в экспериментальных животных является одним из основных подхода для демонстрации их патогенности 7, -12. Животные модели, полученные с помощью этого метода, помимо того, что косвенным свидетельством аутоиммунных 13, позволяют исследование эфферен…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Авторы признают поддержки за счет субсидий из Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 и БИОСС из медицинского факультета Университета Фрайбурга (для CS).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
recombinant antigen The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author.
immune rabbit serum www.eurogentec.com We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium.
Protein G agarose Roche Applied Science 11243233001
Balb/c mice Charles River Laboratories
OCT compound, Tissue-Tek Sakura Finetek 4583 OCT, optimal cutting temperature
Cryomold standard Sakura Finetek 4557 25 mm × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediate Sakura Finetek 4566 15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette R. Langenbrinck 09-0503 Histology processing and embedding cassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG 71492000 tattooing paste
Tatowierzange TZ1 EBECO E. Becker & Co GmbH tattooing device
Heparin Carl Roth GmbH & Co. 7692.1
Formaldehyde 37% Carl Roth GmbH & Co. 7386
Ketamine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH K2753-1G
Xylazine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH X1251-1G
sterile PBS Biochrom L182-50
digital camera Nikon Coolpix 5400
Syringe driven filter unit 0.45 μm Millipore
Caliper Mitutoyo 7309 1667338 Farnell (distributor)
disease scoring sheet example enclosed

References

  1. Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
  2. Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
  3. Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
  4. Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
  5. Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
  6. Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
  7. Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
  8. Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
  9. Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
  10. Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
  11. Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
  12. Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
  13. Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky’s postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
  14. Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
  15. Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
  16. Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
  17. Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).

Play Video

Cite This Article
Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).

View Video