שלפוחיות עור Autoantibody-Induced granulocyte תלויים
Summary
במודל של בעלי החיים המתוארים בעבודה הנוכחית שלנו, מטוהרי נוגדני IgG נגד מתיחה של 200 חומצות אמינו (aa 757-967) של קולגן VII מוזרקים שוב ושוב לעכברים להתרבות פנוטיפ שלפוחיות כמו גם histo וimmunopathological תכונות אופייניות לאדם epidermolysis ולוזה acquisita (EBA)<sup> 1</sup>.
Abstract
תופעות אוטואימוניות להתרחש אצל אנשים בריאים, אבל כאשר סובלנות עצמית נכשלה, התגובה אוטואימונית עלולה לגרום לפתולוגיה ספציפית. לדברי Witebsky של נחות היסוד, אחד מהקריטריונים באבחון מחלה אוטואימונית כהיא השעתוק של המחלה בחיות מעבדה על ידי ההעברה הפסיבית של נוגדנים עצמיים. לepidermolysis ולוזה acquisita (EBA), מחל אוטואימונית איבר ספציפי לאבטיפוס של קרום עור ורירי, מספר מודלים ניסיוניים שהוקמו לאחרונה. במודל של בעלי החיים המתוארים בעבודה הנוכחית שלנו, מטוהרי נוגדני IgG נגד מתיחה של 200 חומצות אמינו (aa 757-967) של קולגן VII מוזרקים שוב ושוב לעכברים להתרבות פנוטיפ שלפוחיות כמו גם histo וimmunopathological תכונות אופייניות לאדם 1 EBA. מחלה נפוצה במלוא מובן מילה נתפסת בדרך כלל 5-6 ימים לאחר הזריקה הראשונה והיקף המחלה בקורלציה עם המינון של c מנוהלollagen השביעי ספציפי IgG. הניזק לרקמות (היווצרות שלפוחית) בEBA הניסיוני בהתאם לגיוס וההפעלה של גרנולוציטים ידי נוגדנים עצמיים רקמות בכריכת 2, -4. לכן, מודל זה מאפשר לנתיחה של המסלול הדלקתי granulocyte התלוי המעורבים בניזק לרקמה אוטואימונית, כמודל מתרבה רק שלב T תא העצמאי של התגובה אוטואימונית efferent. יתר על כן, הערך שלו מודגש על ידי מספר המחקרים הממחישים את פוטנציאל שלפוחית וישכנע של נוגדנים עצמיים בגוף חי וחוקרים את מנגנון היווצרות הכיב בEBA 1,3, -6. לבסוף, מודל זה יהיה מאוד להקל על הפיתוח של טיפולים חדשים נגד הדלקת במחל autoantibody מושרות. בסך הכל, מודל חית ההעברה הפסיבית של EBA הוא מודל מחלה נגישה ומאלף ויסייע לחוקרים לנתח לא רק פתוגנזה EBA אבל לענות בסיסי ביולוגי וקלינישאלות אוטואימוניות חיוניות.
Protocol
Representative Results
Discussion
ההעברה הפסיבית של נוגדנים עצמיים לחיות ניסוי היא גישה עיקרית להוכחת פתוגניות 7, -12. מודלים של בעלי חיים שהושגו באמצעות שיטה זו, בנוסף להיות עדות העקיפה לאוטואימוניות 13, לאפשר את חקירתו של שלב efferent של המנגנון הפתוגני. מודל ההעברה הפסיבית של נוגדני עור המושר?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
החוקרים מכירים בתמיכה על ידי מענקים מForschungsgemeinschaft דויטשה SI-1281/4-1 וBIOSS מהפקולטה לרפואה באוניברסיטת פרייבורג (לCS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker & Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH & Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH & Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky’s postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
