Субретинальной инъекция генной терапии векторы и стволовых клеток в мышь глаз
Summary
Этот хирургический метод иллюстрирует введение генной терапии векторы и стволовых клеток в субретинальной пространство мыши глаз.
Abstract
Потеря зрения затрагивает около 3,4 млн. человек в США и, как ожидается, увеличится в ближайшие годы. 1 Недавно, генной терапии и трансплантации стволовых клеток стали ключевыми лечебного средства для лечения слепоты в результате дегенеративных заболеваний сетчатки. Несколько форм аутотрансплантации для возрастной макулярной дегенерации (ВМД), таких, как ирис пигментного эпителия клеточной трансплантации, вызвали обнадеживающие результаты, и человеческие клинические испытания начались для других форм терапии генов и стволовых клеток. 2 Они включают в себя ген RPE65 замены терапии у пациентов с врожденным амаврозом Лебера и НПП трансплантации клеток с использованием человеческих эмбриональных стволовых (ЭС) клеток при болезни Штаргардта. 3-4 Теперь, когда есть генной терапии векторы и стволовых клеток для лечения пациентов с заболеваниями сетчатки, важно, чтобы проверить этих потенциальных методов лечения на животных моделях, прежде чем применятьING их в исследованиях на человеке. Мышь стала важной научной модели для проверки терапевтической эффективности генной терапии векторы и трансплантации стволовых клеток в глазу. 5-8 В этом видео статье мы представляем технику для введения генной терапии векторы или стволовых клеток в субретинальной пространстве мышь глаз при сведении к минимуму повреждение окружающих тканей.
Protocol
Representative Results
Discussion
Это видео техника дает инструкции по заполнению субретинальной инъекции хирургическую процедуру успешно, и обеспечение того, чтобы вектор генная терапия или стволовые клетки находятся в том месте, необходимо эффективное лечение офтальмологических заболеваний. Эта техника позволяет…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Исследования по профилактике слепоты; экспериментальной помощь от Такаюки Нагасаки; Это исследование соответствует ARVO Заявление для использования животных в офтальмологический и визуальных исследований. KJW поддерживается грантами NIH 5T32EY013933 и 5T32DK007647-20. ВБМ поддерживается NIH грант K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco’s Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12″; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
References
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. . A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
