Fare Göz içine Gen Terapisi Vektörler ve Kök Hücre Subretinal Enjeksiyon
Summary
Bu cerrahi teknik fare gözün subretinal boşluk içine gen terapisi vektörleri ve kök hücrelerinin enjeksiyonu göstermektedir.
Abstract
Görme kaybı Amerika Birleşik Devletleri'nde yaklaşık 3.4 milyon insanı etkileyen ve önümüzdeki yıllarda daha da artacağı beklenmektedir. Son 1, gen tedavisi ve kök hücre nakilleri retinal dejeneratif hastalıklardan kaynaklanan körlük tedavisinde önemli terapötik araç haline gelmiştir. Böyle iris pigment epitel hücre transplantasyonu gibi yaşa bağlı makula dejenerasyonu için otolog transplantasyon çeşitli formları (AMD), ümit verici sonuçlar yarattı ve insan klinik gen ve kök hücre tedavileri diğer formları için başladık. 2 Bunlar RPE65 gen değiştirme dahil Leber konjenital amarozu ve Stargardt hastalığında insan embriyonik kök (ES) hücreler kullanılarak RPE hücre nakli olan hastalarda tedavi. 3-4 Şimdi gen tedavisi vektörleri ve retina hastalıkları olan hastaların tedavisinde kök hücre mevcuttur olduğunu, bunu doğrulamak için önemlidir hayvan modellerinde bu potansiyel tedavilerin önce başvurmalarıinsan çalışmalarında bunları ing. Fare göz gen tedavisi vektörleri ve kök hücre nakli tedavi etkinliğinin saptanması için önemli bir bilimsel model haline gelmiştir. Bu video makalede 5-8, biz subretinal alana gen tedavisi vektörleri veya kök hücreleri enjekte için bir yöntem sunmak fare gözü çevreleyen doku hasarı en aza indirerek.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu video tekniği başarıyla subretinal enjeksiyon cerrahi prosedürünü tamamladıktan ve gen terapi vektörü veya kök hücreleri verimli oftalmik hastalığı tedavi etmek için gerekli konuma yerleştirilir sağlanması ile ilgili yönergeler sağlar. Bu hücrelerin çevresinde gen terapisi vektörleri ya da kök hücresi kaynaklı dokuların yerleştirilir çünkü bu yöntem, böyle bir RPE ve fotoreseptör gibi retinal hücre hedefleme için olanak sağlar. Önceki yöntemler sıvı vitreus boşluğu içinde y…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Takayuki Nagasaki Deneysel yardım;; Körlük Engellenir Araştırma Bu araştırma Oftalmik ve Görsel Araştırma Hayvanları Kullanım ARVO Bildirimi ile uyumludur. KJW NIH yardımlar 5T32EY013933 ve 5T32DK007647-20 tarafından desteklenmektedir. VBM NIH hibe K08EY020530 tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco’s Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12″; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
References
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. . A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
