बढ़ते Axons साथ murine श्वान सेल विकास का विश्लेषण
Summary
यहाँ हम एक श्वान (SC) सेल प्रवास परख में जो अनुसूचित जातियों के साथ का विस्तार axons विकसित करने में सक्षम हैं का वर्णन करता है.
Abstract
परिधीय नसों का विकास एक पेचीदा प्रक्रिया है. न्यूरॉन्स axons बाहर भेजने के लिए विशिष्ट लक्ष्य है, जो इंसानों में अक्सर 100 से अधिक सेमी न्यूरॉन सोमा से दूर कर रहे हैं अंदर आना. विकास के दौरान अस्तित्व Neuronal लक्ष्य व्युत्पन्न वृद्धि कारकों पर भी श्वान कोशिकाओं (एससी) के समर्थन पर निर्भर करता है. Synapse या neuromuscular जंक्शन neuronal सोम (या केंद्रीय से परिधीय तंत्रिका तंत्र के संक्रमण) के क्षेत्र से यह अंत अनुसूचित जाति ensheath axons. श्वान कोशिकाओं तंत्रिका शिखा के डेरिवेटिव हैं और उभरते axons साथ व्यापारियों के रूप में विस्थापित जब तक पूरे अक्षतंतु अनुसूचित जातियों के साथ कवर किया जाता है. यह परिधीय तंत्रिका तंत्र के विकास के लिए अनुसूचित जाति के माइग्रेशन के महत्व को दर्शाता है और इस प्रक्रिया की जांच की आवश्यकता को रेखांकित. आदेश में अनुसूचित जाति के विकास का विश्लेषण करने के लिए, एक सेटअप की जरूरत है, जो अनुसूचित जातियों के लिए आगे भी उनके प्रवास के लिए शारीरिक सब्सट्रेट, अक्षतंतु शामिल. अंतर्गर्भाशयी विकास के कारण <e> vivo इमेजिंग समय चूक में, तथापि, माउस तरह अपरा रीढ़ में संभव नहीं है (mus मस्कुलस). इस नाकाम करने के लिए, हम बेहतर ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि (एससीजी) explant तकनीक रूपांतरित किया. तंत्रिका वृद्धि कारक (NGF) के साथ इलाज करने पर एससीजी explants axons बाद, अनुसूचित जाति axons साथ नाड़ीग्रन्थि से परिधि के लिए पलायन व्यापारियों द्वारा विस्तार. इस प्रणाली की खूबसूरती यह है कि अनुसूचित जाति अंतर्जात अनुसूचित जाति के एक पूल से प्राप्त कर रहे हैं और वे अपने स्वयं के शारीरिक axons है जो एक ही समय में बढ़ रहे हैं विस्थापित साथ. इस प्रणाली को विशेष रूप से पेचीदा है, क्योंकि axons साथ अनुसूचित जाति के विकास के समय चूक इमेजिंग द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है, आगे की संभावनाओं को खोलने के लिए अनुसूचित जाति प्रवास में अंतर्दृष्टि लाभ.
Protocol
Representative Results
Discussion
परिधीय तंत्रिका तंत्र के विकास के लिए एक रोमांचक प्रक्रिया है. जब विकास पूरा हो गया है, axons पूरी लंबाई, है, जो मनुष्यों में अक्सर 100 सेमी से अधिक के साथ अनुसूचित जातियों द्वारा ensheathed कर रहे हैं. यह अंत करने के ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए एक कोलेजन प्रोटोकॉल और Jutta मरनेवाला और उर्सुला Hinz साझा करने के लिए Urmas Arumae शुक्रिया अदा करना चाहता हूँ. इसके अलावा हम ईसाई एफ Ackermann, उल्रिके Engel और Nikon इमेजिंग सेंटर हीडलबर्ग विश्वविद्यालय में और भी Joachim Kirsch कृपया वीडियो shoting के लिए मदद के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं. काम आंशिक रूप से ड्यूश Forschungsgemeinschaft (592 SFB) के माध्यम से वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| 10x MEM | Gibco | 21430 | |
| Sodium Bicarbonate (7.5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutamine | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R&D#556-NG-100 |
| Neurobasal Medium | Gibco | 21103 | |
| B27 Supplement | Gibco | 17504 | |
| antibiotics | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| insect needles | FST | 26002-20 | |
| syringe needle | Braun | BD # 300013 | |
| 8 well chamber slide | Lab tek | 177402 |
References
- Ebendal, T., Rush, R. A. . Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. IBRO Handh, (1989).
- Heermann, S., SchmÃcker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. Neuregulin 1 type III/ErbB signaling is crucial for Schwann cell colonization of sympathetic axons. PloS One. 6 (12), e28692 (2011).
- Zuo, Y., Lubischer, J. L., Kang, H., Tian, L., Mikesh, M., Marks, A., Scofield, V. L. Fluorescent proteins expressed in mouse transgenic lines mark subsets of glia, neurons, macrophages, and dendritic cells for vital examination. The Journal of Neuroscience. The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (49), 10999-11009 (2004).
- Levi-Montalcini, R., Booker, B. EXCESSIVE GROWTH OF THE SYMPATHETIC GANGLIA EVOKED BY A PROTEIN ISOLATED FROM MOUSE SALIVARY GLANDS. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 46 (3), 373-384 (1960).
- Meintanis, S., Thomaidou, D., Jessen, K. R., Mirsky, R., Matsas, R. The neuron-glia signal beta-neuregulin promotes Schwann cell motility via the MAPK pathway. Glia. 34 (1), 39-51 (2001).
- Yamauchi, J., Miyamoto, Y., Chan, J. R., Tanoue, A. ErbB2 directly activates the exchange factor Dock7 to promote Schwann cell migration. The Journal of cell biology. 181 (2), 351-365 (2008).
- Anton, E. S., Weskamp, G., Reichardt, L. F., Matthew, W. D. Nerve growth factor and its low-affinity receptor promote Schwann cell migration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (7), 2795-2799 (1994).
- Mahanthappa, N. K., Anton, E. S., Matthew, W. D. Glial growth factor 2, a soluble neuregulin, directly increases Schwann cell motility and indirectly promotes neurite outgrowth. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 16 (15), 4673-4683 (1996).
- Yamauchi, J., Chan, J. R., Shooter, E. M. Neurotrophins regulate Schwann cell migration by activating divergent signaling pathways dependent on Rho GTPases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (23), 8774-8779 (2004).
- Gumy, L. F., Bampton, E. T. W., Tolkovsky, A. M. Hyperglycaemia inhibits Schwann cell proliferation and migration and restricts regeneration of axons and Schwann cells from adult murine DRG. Molecular and Cellular Neurosciences. 37 (2), 298-311 (2008).
- Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Osawa, H., Kashiwagi, S. Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression. Cell. 132 (3), 487-498 (2008).
- Park, D., Don, A. S., Massamiri, T., Karwa, A., Warner, B., MacDonald, J., Hemenway, C. Noninvasive imaging of cell death using an Hsp90 ligand. Journal of the American Chemical Society. 133 (9), 2832-2835 (2011).
- Shcherbo, D., Souslova, E. A., Goedhart, J., Chepurnykh, T. V., Gaintzeva, A., Shemiakina, I. I., Gadella, T. W. J., Lukyanov, S., Chudakov, D. M. Practical and reliable FRET/FLIM pair of fluorescent proteins. BMC Biotechnology. 9, 24 (2009).
