Summary

Analizar el desarrollo de células murinas Schwann largo de los axones en crecimiento

Published: November 21, 2012
doi:

Summary

Aquí se describe una célula de Schwann (CS) ensayo de migración en el que las SC son capaces de desarrollar a lo largo de los axones se extienden.

Abstract

El desarrollo de los nervios periféricos es un proceso intrigante. Las neuronas envían axones inervan a los objetivos específicos, que en los seres humanos son a menudo más de 100 cm de distancia del soma de la neurona. La supervivencia neuronal durante el desarrollo depende de factores de crecimiento derivados de meta-, sino también sobre el soporte de las células de Schwann (SCS). Para este axones ensheath finales SC de la región del soma neuronal (o la transición de la central en el sistema nervioso periférico) a la sinapsis o unión neuromuscular. Células de Schwann son derivados de la cresta neural y migran como precursores a lo largo de los axones emergentes hasta el axón está cubierto con SCS. Esto muestra la importancia de la SC de migración para el desarrollo del sistema nervioso periférico y subraya la necesidad de investigar este proceso. Con el fin de analizar SC desarrollo, una configuración que se necesita al lado de los SCS también incluye su sustrato fisiológico para la migración, el axón. Debido al desarrollo intrauterino <em> in vivo imágenes a intervalos de tiempo, sin embargo, no es factible en los vertebrados placentarios como el ratón (Mus musculus). Para evitar esto, hemos adaptado el superior ganglio cervical (SCG) Técnica de explante. Tras el tratamiento con factor de crecimiento nervioso (NGF) explantes SCG extender axones, seguido de precursores SC migran a lo largo de los axones del ganglio de la periferia. La belleza de este sistema es que el SC se derivan de una piscina de SC endógeno y que migran a lo largo de sus axones propios fisiológicos que están creciendo, al mismo tiempo. Este sistema es especialmente interesante, ya que el desarrollo SC largo de los axones pueden ser analizados por time-lapse, abriendo nuevas posibilidades para obtener información sobre la migración SC.

Protocol

1. Preparación de geles de colágeno Preparar un medio de acción, que contiene 455 l MEM 10x, 112 l 7,5% NaHCO 3, 50 y glutamina l NaOH. La concentración y la cantidad de la solución de NaOH depende de la preparación de colágeno de cola de rata (ver 1,2), el volumen final del medio de archivo de ser 1.000 l. Preparar colágeno de cola de rata de acuerdo con Ebendal (1). Almacenar la solución de colágeno a 4 ° C. Una degradación de la solución de colágeno no se…

Representative Results

El crecimiento axonal se facilita de SCG explantes tras el tratamiento con NGF (4) (esquema película S1 Figura 1 esquema). Este proceso es fácilmente visible por cualquier microscopio invertido y puede ser seguido por imagen de lapso de tiempo (película S2). Si un científico es algo nuevo para la disección de SCG de embriones de ratón es muy recomendable una validación de la técnica por un simple anti-tirosina hidroxilasa (TH) inmunohistoquímica. TH es un marcador común para l…

Discussion

El desarrollo del sistema nervioso periférico es un proceso excitante. Cuando el desarrollo se ha completado, los axones se envainado por SCS a lo largo de toda la longitud, que puede, en los seres humanos, a menudo ser más de 100 cm. Para este fin, el número correcto de los CSs requeridas tiene que ser establecido durante el desarrollo y los SCS también tienen que moverse a lo largo de los axones que se extienden a la periferia para asegurar la cobertura completa axonal. Esto es válido para los axones mielinizados…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Queremos dar las gracias a Arumae Urmas para compartir un protocolo de colágeno y Fey y Jutta Hinz Ursula por su excelente asistencia técnica. Además queremos agradecer a Christian F. Ackermann, Ulrike Engel y la Nikon Imaging Center en la Universidad de Heidelberg y también por la amabilidad de Joachim Kirsch ayuda para el shoting video. El trabajo fue financiado parcialmente a través de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalogue Number Comments
10x MEM Gibco 21430
Sodium Bicarbonate (7.5%) Gibco 25080
Glutamine Gibco 25030
NaOH Merck 109137
NGF Roche 1058231 R&D#556-NG-100
Neurobasal Medium Gibco 21103
B27 Supplement Gibco 17504
antibiotics Gibco 15640
d-PBS Gibco 14040
insect needles FST 26002-20
syringe needle Braun BD # 300013
8 well chamber slide Lab tek 177402

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Cite This Article
Heermann, S., Krieglstein, K. Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons. J. Vis. Exp. (69), e50016, doi:10.3791/50016 (2012).

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