Analizar el desarrollo de células murinas Schwann largo de los axones en crecimiento
Summary
Aquí se describe una célula de Schwann (CS) ensayo de migración en el que las SC son capaces de desarrollar a lo largo de los axones se extienden.
Abstract
El desarrollo de los nervios periféricos es un proceso intrigante. Las neuronas envían axones inervan a los objetivos específicos, que en los seres humanos son a menudo más de 100 cm de distancia del soma de la neurona. La supervivencia neuronal durante el desarrollo depende de factores de crecimiento derivados de meta-, sino también sobre el soporte de las células de Schwann (SCS). Para este axones ensheath finales SC de la región del soma neuronal (o la transición de la central en el sistema nervioso periférico) a la sinapsis o unión neuromuscular. Células de Schwann son derivados de la cresta neural y migran como precursores a lo largo de los axones emergentes hasta el axón está cubierto con SCS. Esto muestra la importancia de la SC de migración para el desarrollo del sistema nervioso periférico y subraya la necesidad de investigar este proceso. Con el fin de analizar SC desarrollo, una configuración que se necesita al lado de los SCS también incluye su sustrato fisiológico para la migración, el axón. Debido al desarrollo intrauterino <em> in vivo imágenes a intervalos de tiempo, sin embargo, no es factible en los vertebrados placentarios como el ratón (Mus musculus). Para evitar esto, hemos adaptado el superior ganglio cervical (SCG) Técnica de explante. Tras el tratamiento con factor de crecimiento nervioso (NGF) explantes SCG extender axones, seguido de precursores SC migran a lo largo de los axones del ganglio de la periferia. La belleza de este sistema es que el SC se derivan de una piscina de SC endógeno y que migran a lo largo de sus axones propios fisiológicos que están creciendo, al mismo tiempo. Este sistema es especialmente interesante, ya que el desarrollo SC largo de los axones pueden ser analizados por time-lapse, abriendo nuevas posibilidades para obtener información sobre la migración SC.
Protocol
Representative Results
Discussion
El desarrollo del sistema nervioso periférico es un proceso excitante. Cuando el desarrollo se ha completado, los axones se envainado por SCS a lo largo de toda la longitud, que puede, en los seres humanos, a menudo ser más de 100 cm. Para este fin, el número correcto de los CSs requeridas tiene que ser establecido durante el desarrollo y los SCS también tienen que moverse a lo largo de los axones que se extienden a la periferia para asegurar la cobertura completa axonal. Esto es válido para los axones mielinizados…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Queremos dar las gracias a Arumae Urmas para compartir un protocolo de colágeno y Fey y Jutta Hinz Ursula por su excelente asistencia técnica. Además queremos agradecer a Christian F. Ackermann, Ulrike Engel y la Nikon Imaging Center en la Universidad de Heidelberg y también por la amabilidad de Joachim Kirsch ayuda para el shoting video. El trabajo fue financiado parcialmente a través de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| 10x MEM | Gibco | 21430 | |
| Sodium Bicarbonate (7.5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutamine | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R&D#556-NG-100 |
| Neurobasal Medium | Gibco | 21103 | |
| B27 Supplement | Gibco | 17504 | |
| antibiotics | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| insect needles | FST | 26002-20 | |
| syringe needle | Braun | BD # 300013 | |
| 8 well chamber slide | Lab tek | 177402 |
References
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