DNAのライゲーション反応

分子生物学において、ライゲーションとは、2つのDNA断片をリン酸ジエステル結合により連結することと定義されています。リガーゼとはライゲーション反応を触媒する酵素であり、細胞内でDNA複製中に生成される一本鎖および二本鎖切断の修復を行います。実験では、DNAリガーセを用いた分子クローニングが行われており、挿入するDNA断片とベクターを連結し、宿主生物内で標的断片を複製するキャリヤDNA分子を作製します。

このビデオでは、DNAライゲーションについて紹介しています。まずはライゲーションの基本原理とライゲーション反応の一般的なセットアップ方法を段階的に説明し、次にライゲーションの重要な鍵となる事項: 付着（粘着）末端の長さの反応温度への影響、セルフライゲーション防止のための挿入するDNA断片（インサート）とベクターの最適な比率、について説明しています。さらに、クレノウ断片やシュリンプ由来アルカリホスファターゼ（SAP）などライゲーション効率を上げるための分子ツール、またプロキシミティライゲーションや塩基配列決定（シークエンシング）のための断片へのリンカーの挿入などの応用例も紹介しています。