Réduit la concentration et la durée d'itraconazole et efficace dans le traitement<em> Batrachochytrium dendrobatidis</em> Maladies infectieuses chez les amphibiens
Summary
infection Batrachochytrium dendrobatidis chez les amphibiens peut être éliminé en utilisant une concentration réduite (0,0025%) et de plus courte durée (bains cinq minutes pendant six jours) de l'itraconazole que ce qui est généralement utilisé. Moins de mortalité et moins d'effets secondaires négatifs ont été observés en utilisant ce protocole de traitement modifié.
Abstract
Amphibiens connaissent la plus forte baisse d'une catégorie de vertébrés et la principale cause de ce déclin est un champignon pathogène, dendrobatidis Batrachochytrium (BD), ce qui provoque la chytridiomycose, maladie. Colonies d'assurance captives sont importantes dans le monde entier pour les espèces d'amphibiens menacées et peuvent être la seule bouée de sauvetage pour ceux qui en menace critique d'extinction. Le maintien de maladies colonies libres est une priorité des gestionnaires captifs, encore des traitements sûrs et efficaces pour toutes les espèces et à travers les étapes de la vie n'ont pas été identifiés. Le traitement chimiothérapeutique le plus utilisé est l'itraconazole, même si la dose utilisée peut être nocif pour certains individus et d'espèces. Nous avons effectué un essai de traitement clinique pour déterminer si une dose plus faible et plus sûr mais efficace de l'itraconazole peut être trouvé pour guérir les infections Bd. Nous avons trouvé que, en réduisant la concentration de 0,01 à 0,0025% le traitement et la réduction de la durée de traitement de 11-6 Jours de 5 min des thermes, grenouilles pourraient être guéris de l'infection Bd avec moins d'effets secondaires et de la mortalité associée au traitement moins.
Introduction
Amphibiens connaissent actuellement le plus grand déclin de la biodiversité de tous les taxons de vertébrés 1. Chytridiomycose, une maladie de la peau causée par les champignons dendrobatidis pathogène Batrachochytrium chytrides (BD), est l'une des principales causes de ces déclins dramatiques 2 Bd est la pire pathogène sur dossier à entraîner la perte de la biodiversité:. Qu'il infecte plus de 600 espèces d'amphibiens et a ont provoqué une baisse de plus de 300 espèces, dont pas moins de 200 espèces sont devenues danger critique d'extinction ou éteintes 2,3. La chytridiomycose amphibie n'est pas l'hôte spécifique et il n'est pas clair quelles sont les qualités de l'hôte permet à l'infection Bd de progresser provoquer une maladie grave. Chytridiomycose provoque la mort en perturbant les canaux ioniques dans la peau, entraînant une perte d'électrolyte et l'insuffisance cardiaque 4. En outre, Bd surnageant (contenant aucun zoospores Bd) provoque une réponse immunitaire chez des têtards 5 leading chercheurs croient Bd produit un sous-produit toxique 6.
Parce que de nombreuses espèces sont en déclin rapide, les colonies d'assurance captives et les programmes d'élevage sont importantes mesures de conservation, et peut-être la seule bouée de sauvetage pour certaines espèces. Établir et maintenir des colonies libres maladie est un défi pour les installations de gestion des amphibiens. Les méthodes actuelles de chimiothérapie pour le traitement des infections Bd, bien qu'efficaces, peuvent être nuisibles pour les animaux qui sont traités, et aucune méthode unique de traitement a été un succès à travers les espèces et classes d'âge de 7 amphibiens.
Peu d'essais cliniques de traitements pour l'infection Bd ont été réalisées 7. Les trois méthodes les plus couramment utilisées sont le traitement thérapie par la chaleur, le chloramphénicol et itraconazole. la thérapie de chaleur est une option de traitement nonchemotherapeutic qui semble avoir peu d'effets secondaires, peuvent être utilisés sur plusieurs étapes de la vie, et est généralementallié efficace. Dans un essai de traitement, Chatfield et Richards Zawacki 8 ont trouvé que 96% des animaux traités a dégagé infections après avoir été logé à 30 ° C pendant 10 jours. Bien que cet essai n'était pas à 100% de réussite, il fournit une base pour d'autres pour évaluer la thérapie de chaleur pour leur propre espèce. Thérapie par la chaleur, mais efficace pour de nombreuses espèces, n'est pas pratique pour de nombreuses espèces alpines qui ne peuvent pas rester à des températures élevées pendant une période de temps prolongée. Chloramphénicol, un antibactérien, a été utilisée avec succès pour traiter Bd chez de nombreuses espèces, et inhibe la croissance fongique in vitro. Comme antibactérien, le chloramphénicol n'attaque pas spécifiquement le champignon mais a été connu pour provoquer l'apoptose dans les cellules eucaryotes 9. Il a été spéculé que la thérapie de chloramphenicol provoque l'apoptose dans la peau, en tuant des sporanges intracellulaire, bien que le mécanisme d'action exact n'est pas connu. Bien qu'aucune étude clinique a été menée, et doncdose et la durée du traitement n'ont pas été évalués, les protocoles de traitement actuels exigent généralement immersion pour deux à quatre semaines 10,11, ce qui en fait un traitement pratique pour les amphibiens terrestres. Chloramphénicol a également été restreinte dans certains pays à usage vétérinaire, car l'exposition humaine a été associée à une forme rare d'anémie aplasique 12.
Itraconazole, un antifongiques azolés, est le plus largement utilisé pour le traitement de l'infection Bd des amphibiens en captivité. Le protocole le plus utilisé est les animaux de bain dans une solution itraconazole 0,01% pour cinq minutes par jour pendant 11 jours consécutifs. Ce protocole a été dérivé de normes utilisées pour l'administration de mammifères, et, tout en étant efficace pour les amphibiens, il n'est pas basé sur les essais cliniques chez les amphibiens 11,13. Ce protocole peut entraîner des effets secondaires négatifs dans certaines espèces, en particulier dans le genre Rana et des têtards et métamorphes dernières 11.Têtard traitement a été couronnée de succès en utilisant une concentration beaucoup plus faible (0,0005%) de l'itraconazole, mais était associée à une dépigmentation 14. Cette concentration a été mis à l'essai même sur métamorphes récentes et a constaté à l'échec à traiter une infection 15. Parce qu'il ya risque d'effets secondaires négatifs avec le traitement itraconazole, certains praticiens ont utilisé la moitié de la concentration habituelle (0,005%) pour 11 jours consécutifs et trouvé ceci pour être réussi à guérir les infections Bd 16.
La présente étude est un résumé d'un essai clinique de traitement utilisant l'itraconazole pour traiter l'infection Bd 15. Le protocole décrit une tentative de trouver la dose la plus faible et le traitement du temps qui est à la fois sûr et efficace pour traiter les animaux infectés Bd avec l'itraconazole. Les animaux utilisés dans cette étude étaient récentes métamorphes de crapauds de côte du golfe, Incilius nebulifer.
Protocol
Representative Results
Discussion
En utilisant ce protocole, nous avons pu réduire en toute sécurité et efficacement la dose et du temps de traitement de traitement pour l'itraconazole Bd des amphibiens. La plus faible dose de traitement et le temps (0,0025% pendant six jours) est un traitement efficace pour I. subclinique infectés nebulifer. L'efficacité des deux une dose plus faible et le temps de traitement de démontrer la nécessité d'essais cliniques de traitement pour les traitements de l'infection…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Je tiens à remercier CL Richards Zawacki l'aide de conceptualiser la conception expérimentale et aider avec des matériaux, A. Pessier de l'aide instituant un régime de traitement et l'autopsie des analyses, MWH Chatfield, MJ Robak, K. Tasker et D. Lenger de l'aide à la laboratoire et de soutien et M. McFadden et P. Harlow au zoo de Taronga pour l'utilisation de leur espace pendant le tournage. Le projet a été financé en partie par la Louisiane Département de la faune et de la pêche grâce à la subvention de la Louisiane Commission de l'éducation de l'environnement décerné à LA Brannelly et par Life Technologies.
Materials
| 0.1% Aqueous Itraconazole, Sporonox | Janssen Pharmaceutica Inc. | |
| NaCl | Fisher Scientific | S640-500 |
| KCl | Fisher Scientific | BP366-1 |
| CaCl2 | Fisher Scientific | BP510-100 |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | BP328-500 |
| Sterile cotton swabs | Medical and Wire Equipment | MW113 |
| 1.5 ml micro tubes | Sarstedt | 73.703.217 |
| Qiagen DNEasy Blood and Tissue Kit | Qiagen | 69581 |
| 7500 Real-time PCR | Applied Biosystems | 4351104 |
| VIC IPC | Applied Biosystems | 4308323 |
| BSA | Applied Biosystems | AM2618 |
| Agar | Invitrogen | 30391023 |
| Tryptone | Invitrogen | Q10029 |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15070-063 |
| Petri Dish | Sigma Aldrich | CLS430589 |
References
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