Un metodo migliore per precisa e rapida misurazione delle performance in volo<em> Drosophila</em
Summary
Qui si descrive un metodo per la misurazione rapida e accurata delle prestazioni di volo in Drosophila, consentendo di screening high-throughput.
Abstract
Drosophila ha dimostrato di essere un sistema modello utile per l'analisi del comportamento, comprensivo di volo. Il tester volo caduta coinvolta iniziale vola in un rivestimento d'olio cilindro graduato, altezza atterraggio fornito una misura della performance di volo da valutare come mosche lontane cadranno prima di produrre abbastanza spinta a mettersi in contatto con la parete del cilindro. Qui si descrive una versione aggiornata del tester volo con quattro importanti miglioramenti. In primo luogo, abbiamo aggiunto un "tubo pescante" per garantire che tutte le mosche entrano nel cilindro volo ad una velocità simile tra la prova, eliminando la variabilità tra gli utenti. In secondo luogo, abbiamo sostituito il rivestimento dell'olio con teli di plastica estraibili rivestiti in Tangle-Trap, un adesivo progettato per catturare insetti vivi. In terzo luogo, usiamo un cilindro più lungo per consentire la discriminazione più accurata capacità di volo. Quarto si usa una fotocamera digitale e software di imaging per automatizzare il punteggio delle prestazioni di volo. Questi miglioramenti consentono il rapid, la valutazione quantitativa del comportamento in volo, utile per grandi dataset e schermi genetici su larga scala.
Introduction
Drosophila è stato a lungo utilizzato per studiare le basi genetiche del comportamento 1, ed i ricercatori hanno messo a punto una serie di modi per analizzare i vari tipi di comportamento 2-6. Le mosche sono stati particolarmente utili per fornire utili modelli di malattie neuromuscolari 7. Un test comunemente usato per studiare il comportamento locomotore è la prestazione di volo. Il tester volo originale è utile per identificare ponti mutanti difettosi e per la valutazione quantitativa della capacità di volo 1, ma ha diversi difetti che ne limitano l'applicazione per schermi ad alto rendimento: l'uso di bombole rivestite petrolio è disordinato e ingombrante, alcune funzionalità come la lunghezza del cilindro e l'introduzione di mosche nel tubo con forza variabile ridurre la precisione quantitativa, ed è difficile da recuperare in linea diretta dal tester. Per superare queste limitazioni, abbiamo modificato il tester volo per includere una serie di miglioramenti. Abbiamo aggiunto una "goccia tuessere "introdurre linea per eliminare variabilità tra esperimenti e utenti. Usiamo lastre acriliche rimovibili rivestiti con un adesivo che consente una più facile pulizia e recupero di singoli mosche. Abbiamo aumentato la lunghezza del tubo di volo per migliorare la precisione e l'affidabilità quantitativa. Infine , si usa una fotocamera digitale e software di imaging per calcolare le altezze sbarco di mosche. Crediamo che questi miglioramenti saranno utili a qualsiasi laboratorio interessato a condurre schermi genetici su larga scala per i difetti di prestazioni di volo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Usando i metodi qui descritti, siamo stati in grado di valutare rapidamente le prestazioni di volo di un gran numero di mutanti di Drosophila, fornendo una maggiore efficienza rispetto al passato. Per i nostri esperimenti, abbiamo abitualmente separati maschi e femmine e li alleviamo a bassa densità (meno di 20 mosche / fiala) per limitare l'aggressività che potrebbero danneggiare le ali. Un'altra considerazione importante è quello di controllare adeguatamente le differenze nelle prestazioni di volo …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health concede F32 NS078958 (DTB) e R01 AG033620 (BG).
Materials
| Putty knife | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Pine back band moulding ( x2 ) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
| Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Tangle Trap Insect Trap Coating | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Laptop Computer | Apple | _ | www.apple.com/mac/ |
| mineral oil | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| white poster board | Staples | 247403 | www.staples.com |
| polystyrene weighing dish | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | _ | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| digital camera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| fine forceps | Fine Science Tools | _ | www.finescience.com |
| polycarbonate cylinder (drop tube) | mcMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
| flight cylinder (acrylic) | mcMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| polycarbonate sheets | mcMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| ring stand (x2) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| ring support | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Three-prong extension clamps (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| funnel | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| chain clamps (x2) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| glass vials | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
References
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