Ein verbessertes Verfahren für genaue und schnelle Messung der Flugleistung in<em> Drosophila</em
Summary
Hier beschreiben wir ein Verfahren zum schnellen und genauen Messung der Flugleistung in Drosophila, was eine Hochdurchsatz-Screening.
Abstract
Drosophila hat sich als ein nützliches Modellsystem für die Analyse des Verhaltens, einschließlich der Flug sein. Die ersten Flug Tester beteiligt Drop fliegt in eine Öl-beschichtet Messzylinder; Landehöhe ein Maß für die Flugleistung durch die Beurteilung, wie weit entfernt fallen wird vor der Herstellung genug Schub, um den Kontakt mit der Wand des Zylinders zu machen. Hier beschreiben wir eine aktualisierte Version der Flug-Tester mit vier großen Verbesserungen. Zuerst haben wir eine "Fallrohr", um sicherzustellen, dass alle Fliegen geben Sie die Flug Zylinder bei einer ähnlichen Geschwindigkeit zwischen Studien, wodurch die Variabilität zwischen den Nutzern. Zweitens, die Ölschicht ersetzt wir mit herausnehmbaren Kunststoffplatten in Tangle-Falle, einem Klebstoff entwickelt, um lebende Insekten einzufangen beschichtet. Drittens verwenden wir einen Zylinder mehr, um genauere Unterscheidung der Flugfähigkeit zu ermöglichen. Vierte verwenden wir eine Digitalkamera und Bildbearbeitungssoftware, um die Scoring der Flugleistung zu automatisieren. Diese Verbesserungen ermöglichen die Rap-id, quantitative Bewertung der Flugverhalten, nützlich für große Datenmengen und große genetische Bildschirme.
Introduction
Drosophila ist seit langem verwendet, um die genetischen Grundlagen von Verhalten 1 zu studieren, und Forscher haben eine Reihe von Möglichkeiten, um verschiedene Arten von Verhalten analysieren 2-6 entwickelt. Fliegen haben sich als besonders nützlich, um nützliche Modelle von neuromuskulären Erkrankungen 7 gewesen. Ein gemeinsamer Test verwendet, um Bewegungsverhalten zu studieren, ist Flugleistung. Die ursprünglichen Flug Tester ist nützlich für die Identifizierung Flug Mutanten und quantitative Bewertung der Flugfähigkeit ein, aber es hat einige Mängel, die seine Anwendung für Hochdurchsatz-Screening zu begrenzen: die Verwendung von Öl-beschichteten Zylindern ist chaotisch und umständlich, bestimmte Features wie die Länge des Zylinders und der Einführung der Fliegen in das Rohr mit variabler Kraft zu reduzieren quantitative Genauigkeit, und es ist schwierig, lebende entfernt von dem Testgerät zu erholen. Um diese Einschränkungen zu überwinden, haben wir den Flug Tester modifiziert, um eine Reihe von Verbesserungen enthalten. Wir haben einen "Tropfen tuwerden ", um Fliegen, um die Variabilität zwischen den Experimenten und Benutzer zu beseitigen einzuführen. Wir verwenden abnehmbaren Acrylplatten mit einem Klebstoff, der für eine einfachere Bereinigung und Wiederherstellung einzelner Fliegen ermöglicht beschichtet. Wir haben die Länge der Flugrohr erhöht, um quantitative Genauigkeit und Zuverlässigkeit zu verbessern. Schließlich verwenden wir eine Digitalkamera und Bildbearbeitungssoftware, um die Landung Höhen von Fliegen zu berechnen. Wir glauben, diese Verbesserungen sinnvoll, jedem Labor interessiert bei der Durchführung von Großbildschirme für genetische Defekte in Flugleistung sein.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mit den hier beschriebenen Methoden haben wir in der Lage, schnell zu beurteilen Flugleistung aus einer großen Anzahl von Drosophila-Mutanten, die Bereitstellung effizienter als bisher möglich. Für unsere Experimente haben wir routinemäßig zu trennen Männer und Frauen, und heben Sie sie bei geringer Dichte (weniger als 20 Fliegen / Fläschchen), um Aggression, die Flügel Schaden zu begrenzen. Ein weiterer wichtiger Aspekt ist für die Unterschiede in der Flugleistung wegen der unterschiedlichen genetisch…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health gewährt F32 NS078958 (DTB) und R01 AG033620 (BG).
Materials
| Putty knife | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Pine back band moulding ( x2 ) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
| Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Tangle Trap Insect Trap Coating | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Laptop Computer | Apple | _ | www.apple.com/mac/ |
| mineral oil | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| white poster board | Staples | 247403 | www.staples.com |
| polystyrene weighing dish | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | _ | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| digital camera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| fine forceps | Fine Science Tools | _ | www.finescience.com |
| polycarbonate cylinder (drop tube) | mcMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
| flight cylinder (acrylic) | mcMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| polycarbonate sheets | mcMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| ring stand (x2) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| ring support | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Three-prong extension clamps (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| funnel | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| chain clamps (x2) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| glass vials | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
References
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