İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon
Summary
Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.
Abstract
Kanser kök hücre (CSC) modeli ölçüde son iki yılda yeniden gözden geçirilmiştir. Bu süre boyunca CSCS tanımlanır ve doğrudan insan dokularından izole edilmiş ve seri olarak, tipik olarak akış sitometrisi ile hücrelerin ve fraksiyonlama alt grupları antikor etiketleme yoluyla, bağışıklık yetersizliği olan farelerde yayılır edilmiştir. Bununla birlikte, prostat kanseri benzersiz klinik özellikleri önemli ölçüde taze insan tümör örneklerinden prostat CSCS olan çalışma sınırlıdır. Yakın zamanda, HLA sınıf I (HLAI)-negatif fenotipi nedeniyle, doğrudan insan dokularından prostat CSCS izolasyonunu bildirdi. Prostat kanser hücreleri cerrahi örneklerden hasat edilir ve mekanik olarak ayrıştırılırlar. Bir hücre süspansiyonu üretilir ve floresan konjuge HLAI ve stromal antikorlar ile etiketlenir. HLAI-negatif hücrelerin alt grubu son olarak bir akış sitometrisi kullanılarak izole edilmiştir. Bu protokolün başlıca sınırlaması sık mikroskobik ve multifokal doğaprostatektomi örneklerinde primer kanser. Bununla birlikte, izole edilmiş canlı prostat CSCS bağışıklık yetersizliği olan farelerde nakli ile moleküler karakterizasyonu ve fonksiyonel doğrulama için uygundur.
Introduction
Tümör içine heterojenlik kanser 1 ayırt edici bir özelliği olarak kabul edilir. Gerçekten de, tümör heterojenite çeşitli mekanizmalar genetik mutasyon ve mikro etkileşimler de dahil olmak üzere tarif edilmiştir. Buna ek olarak, bazı kanser türleri seri nakli deneylerinde 2-5 tümör başlatıcı kapasitesi ve kendini yenileme özelliklerini sergileyen kanser kök hücreleri (rulmanları) bir alt popülasyonunun bir hücresel hiyerarşisi içerebilir. Başlangıçta hematolojik 6, meme 7, 8 ve beyin habis de tarif CSCS aynı zamanda prostat kanseri 9-12 hem de diğer tümör tipleri 2-5 incelenmiştir.
CSCS genellikle oluşan heterojen bir topluluk içinde 2-5 hücresel fraksiyon olarak kabul edilir. Bu nedenle, CSCS fonksiyonel ve moleküler karakterizasyonu toplu nüfus onların zenginleşmesine şarta. Buna göre, son iki yılda çeşitli buluştuCSC zenginleştirme hodologies tipik olarak akış sitometrisi ile işaretlenmiş popülasyonlarının ayrılmasını içerir ki tasarlanmıştır. Buna ek olarak, CSCS çalışmada önemli bir husustur insan dokularının hiyerarşik organizasyonu, kültür veya bağışıklık yetersizliği olan farelerde seri pasaj olarak deneysel manipülasyonlar tarafından kesintiye edilebilir olmasıdır. Sonuç olarak, insan dokularından CSCS doğrudan izolasyon CSC alanda önemli bir yöntem olarak ortaya çıkmıştır.
Prostat kanseri kanser morbidite ve Amerika Birleşik Devletleri'nde ve dünya çapında 13 ölüm önde gelen bir nedenidir. Bu nedenle, prostat CSCS izolasyonu ve biyolojik karakterizasyonu önemli ilgi konusudur. Prostat CSCS önce hücre hatları, hasta türetilmiş ksenograftlarının ve düşük geçiş hasta süspansiyon kültürlerinden türetilmiş 9,10,12,14 ikinci zenginleştirilmiştir.
Biz son zamanlarda direkt olarak insan cerrahi s prostat CSCS izolasyonuna bildirdiOnların HLAI-negatif hücre yüzey fenotip 10 sayesinde depas'lar. Burada ayrıntılı bu hücrelerin izolasyonu için uygulanan prosedürler WE. Prostat tümörler cerrahi örneklerden hasat edildi ve hücre süspansiyonları içine yapılır. Hücreler daha sonra HLAI karşı antikorlar hem de stromal ve canlılığı belirteçleri kullanılarak lekelenmektedir, CSCS ve floresan aktive hücre sıralama (FACS) ile izole edilir. İzole CSCS sonra yaşayabilir hücreler gerektiren deneyleri için de kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokol, taze insan prostat kanseri dokulardan CSCS izolasyonunu tarif eder. Birçok önemli hususlar bu protokolün başarılı sonucunu etkiler.
Uygun bir prostat kanseri hücrelerinin yüksek sayıda geri kazanım Cerrahi numunelerin dikkat brüt değerlendirmesine bağlıdır. Makroskopik tümör nodüller gözlendi ve 10 işlendiğinde bizim deneyim, tümörijenik prostat hücrelerinin başarılı izolasyonu iyi sağlanır.
Bununla birlikte, p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Hariri Ailesi Vakfı ve TJ Martell Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Materials
| RPMI | Gibco Life Technologies | 11875-093 | |
| Fetal bovine serum | Gibco Life Technologies | 10437-028 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15140-122 | |
| PBS | Corning cell gro | 21-031-CM | |
| 60 mm-15 mm cell culture dish | Corning | 3295 | |
| 35 µm Cell Strainer | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml conial tube | Crystalgen | 23-2263 | |
| 15 ml conical tune | Crystalgen | 23-2265 | |
| Red blood cell lysing buffer | Sigma | R7757 | |
| HLA class I (W6/32) PE antibody | Abcam | ab43545 | |
| CD31 FITC antibody | ebioscience | 11-0319-42 | |
| CD45 FITC antibody | Abcam | ab27287 | |
| IgG2aκ PE antibody | BD Pharminogen | 555574 | |
| IgG1κ FITC antibody | BD Pharminogen | 551954 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| 12 x 75 mm polystyrene tubes with cell strainer cap | BD Falcon | 352235 | |
| Vortex Mixer | Crystalgen | CG-BV1000 | |
| 10% Neutral Buffer Formalin | Fisher | RBBP-0480 |
References
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty. Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).
- Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. Cancer stem cells: an evolving concept. Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).
- Valent, P., et al. Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details. Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).
- Visvader, J. E., Lindeman, G. J. Cancer stem cells: current status and evolving complexities. Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).
- Lapidot, T., et al. A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice. Nature. 367, 645-648 (1994).
- Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).
- Singh, S. K., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature. 432, 396-401 (2004).
- Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells. Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).
- Domingo-Domenech, J., et al. Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells. Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).
- Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells. Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).
- Qin, J., et al. The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration. Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics, 2013. CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).
- Patrawala, L., et al. Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells. Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).
