अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं की स्रावी क्षमता का आकलन
Summary
पृथक अग्नाशय acini उनके इन विवो आकारिकी और गतिविधि को बनाए रखने और निगरानी और स्राव जोड़ तोड़ के लिए शक्तिशाली तरीके प्रदान करते हैं. इस काम acini माउस अग्न्याशय से अलग किया जा सकता है, और उनके स्रावी क्षमता कैसे मूल्यांकन किया जा सकता है दर्शाता है.
Abstract
अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के निर्माण और पाचन एंजाइमों का स्राव. इन कोशिकाओं को एक संयुक्त लुमेन रूपों और शेयर जो एक क्लस्टर के रूप में आयोजित कर रहे हैं. यह काम इन कोशिकाओं के स्राव का क्षमता अलग acini की संस्कृति से मूल्यांकन किया जा सकता है दर्शाता है. बरकरार बहि अग्न्याशय की कई विशेषताओं को बनाए रखने, जो पृथक acini, चालाकी और पूरे पशु की तुलना में अधिक आसानी से नजर रखी जा सकती क्योंकि सेटअप फायदेमंद है. पूर्व vivo संस्कृति acini के vivo प्रकृति का प्रतिनिधित्व करेंगे कि इतने अग्नाशय acini के समुचित अलगाव एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है. प्रोटोकॉल माउस अग्न्याशय से बरकरार acini अलग करने के लिए कैसे करें. बाद में, अग्नाशय के स्राव के मूल्यांकन के लिए दो पूरक तरीकों प्रस्तुत कर रहे हैं. अग्नाशय के स्राव का प्रत्यक्ष इमेजिंग एक उप सेलुलर संकल्प पर स्राव के लक्षण वर्णन अनुमति देता है, जबकि एमिलेज स्राव परख, एक वैश्विक उपाय के रूप में कार्य करता है. सामूहिक रूप से, तकनीक presenटेड यहाँ बहि: स्राव का अध्ययन करने के प्रयोगों की एक व्यापक स्पेक्ट्रम सकें.
Introduction
बहि अग्न्याशय स्तनधारी अग्न्याशय का द्रव्यमान का सबसे गठन और पाचन एंजाइमों 1 के उत्पादन और स्राव के लिए समर्पित है. बहि अग्न्याशय, एसिनस, के कार्यात्मक इकाई एक संयुक्त लुमेन रूपों और शेयरों जो उपकला कोशिकाओं का एक समूह है. हार्मोनल या neuronal उत्तेजना पर, एंजाइमों से भर पुटिकाओं इसके साथ, शिखर कोशिका की सतह तक फ्यूज ले जाया जाता है और लुमेन 1-3 में अपनी सामग्री निष्कासित. स्रावित एंजाइमों तो वे पोषक तत्वों में भोजन के टूटने उत्प्रेरित जहां छोटी आंत में नलिकाओं की एक coalescing सेट से सूखा कर रहे हैं.
यह वीडियो पूरे अग्न्याशय से अलग कर रहे हैं और उनके स्रावी क्षमता कैसे मूल्यांकन किया जा सकता है कि कैसे बरकरार acini दर्शाता है. इस स्थापना का उपयोग कर, अग्नाशय के स्राव उत्तेजना के बाद जारी किया गया था कि एमिलेज के रिश्तेदार राशि को मापने के द्वारा मात्रा निर्धारित है. वैकल्पिक रूप से, स्राव अलग के उपयोग से लाइव imaged किया जा सकता हैसेंसर और रंजक.
बरकरार अग्न्याशय की कई विशेषताओं को बनाए रखने, जो पृथक acini, चालाकी और पूरे पशु 4-6 की तुलना में अधिक आसानी से नजर रखी जा सकती क्योंकि अग्नाशय acini के पूर्व vivo सेटअप फायदेमंद है. इस सेटअप मूल रूप से देर से 1970 में विकसित किया है और इस तरह के लार और स्तन ग्रंथियों 3-7 के रूप में कई बहि ऊतकों का अध्ययन के लिए बढ़ाया के बाद किया गया था. विशेष रूप से, यह इन polarized epithelia की जटिल सेलुलर संगठनों के लिए कम से कम हस्तक्षेप के साथ स्राव के अध्ययन की अनुमति देता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
पूर्व vivo संस्कृति इसके अलावा, बहि: स्राव के अध्ययन के लिए वैकल्पिक setups अग्नाशय वाहिनी से तरल पदार्थ की intravital माइक्रोस्कोपी और माप शामिल हैं. Intravital माइक्रोस्कोपी लार 10 ग्रंथियों माउस में अच्छी तरह से …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के बी एस अमेरिका इसराइल बीएसएफ से एक अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया और EDSBS आणविक आनुवंशिकी में हिल्डा और सेसिल लुईस प्राध्यापकीय कुर्सी के एक अवलंबी है.
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
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