Het beoordelen van de Secretory Capaciteit van Pancreatic acinuscellen

Summary

Geïsoleerde pancreas acini behouden hun in vivo morfologie en activiteit en bieden krachtige mogelijkheden voor het monitoren en manipuleren secretie. Dit werk toont hoe acini kan worden geïsoleerd uit de muis alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld.

Abstract

Acinaire cellen produceren en uitscheiden spijsverteringsenzymen. Deze cellen zijn georganiseerd als een cluster, die een gezamenlijke lumen vormt en aandelen. Dit werk laat zien hoe de secretoire capaciteit van deze cellen kan worden bepaald door de cultuur van geïsoleerde acini. De opstelling is voordelig aangezien geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte exocriene pancreas behouden kunnen worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier. Een goede isolatie van pancreatische acini is een eerste vereiste zodat het ex vivo kweken van de in vivo aard van de acini vertegenwoordigt. Het protocol laat zien hoe intact acini isoleren van de muis pancreas. Vervolgens twee complementaire methoden voor de evaluatie pancreassecretie worden gepresenteerd. De amylase secretie assay dient als een globale maat, terwijl de directe beeldvorming van de pancreas secretie kan de karakterisering van afscheiding bij een sub-cellulaire resolutie. Gezamenlijk de technieken presented hier staat een breed spectrum van experimenten exocriene secretie bestuderen.

Introduction

De exocriene pancreas vormt meeste van de massa van de pancreas van zoogdieren en is gewijd aan de productie en secretie van spijsverteringsenzymen ^1. De functionele eenheid van de exocriene pancreas, de acinus is een cluster van epitheliale cellen die een gemeenschappelijke lumen vormt en aandelen. Bij hormonale neuronale stimulatie, zijn blaasjes gevuld met enzymen getransporteerd naar het apicale celoppervlak, zekering met het verdrijven en de inhoud ervan in het lumen ^1-3. Het uitgescheiden enzymen worden vervolgens afgevoerd door een coalescentie aantal kanalen in de dunne darm, waar ze katalyseren de afbraak van voedsel in voedingsstoffen.

Deze video laat zien hoe intact acini worden geïsoleerd van de gehele alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld. Met behulp van deze opstelling wordt pancreassecretie gekwantificeerd door het meten van de relatieve hoeveelheid amylase die werd uitgebracht na stimulatie. Alternatief kan secretie live afgebeeld door het gebruik van verschillendesensoren en kleurstoffen.

De ex vivo opstart pancreatische acini is voordelig omdat geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte alvleesklier behouden kan worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier ^4-6. Deze opstelling werd oorspronkelijk ontwikkeld in de late jaren 1970 en was sinds verlengd voor de studie van verscheidene exocriene weefsels zoals het speeksel en borstklieren ^3-7. Met name is het mogelijk de studie van secretie met minimale interferentie met de complexe cellulaire organisatie van deze gepolariseerde epitheel.

Protocol

OPMERKING: De procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan het Weizmann Institute of Science. 1 Monstervoorbereiding Isolatie van pancreatische acini Bereid 300 ml vers Krebs-Ringer bicarbonaat HEPES (KRBH) medium voordat u begint. Meng 140 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,16 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 11 mM glucose, 10 mM HEPES. Voeg runderserumalbumine (BSA) en 0,1 mg / ml sojaboontrypsineremmer (…

Representative Results

Pancreas acini die goed werden geïsoleerd weer een stereotype morfologie wanneer het voor een licht. Hun basolateral domeinen moeten verschijnen rond en zonder blaasjes. De apicale domein wordt omgeven door honderden secretorische blaasjes en donkerder van kleur (Figuur 2A, B). De kernen liggen basale aan de vesiculaire gebied. Celafval en onderdelen van de pancreas ductaal systeem en de endocriene pancreas, dat kan worden gedetecteerd in een vroeg stadium van acini isolatie (figuur 2C, D),</st…

Discussion

Naast het ex vivo kweken, alternatieve opstellingen voor de studie van exocriene secretie omvatten intravitale microscopie en meting van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus. Intravitale microscopie bleek goed werken in de muis speekselklieren ^10. Deze werkwijze kan opnemen secretie in real time in het intacte dier, maar is beperkt in de resolutie en de middelen voor het manipuleren van de exocriene weefsel. Beoordelen van afscheiding door het verzamelen van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus…

Materials

ICR mice	Harlan		Any strain will do
HBSS	Sigma Aldrich	H8264	Can substitude for KRB
BSA	Sigma Aldrich	A7906	Fraction V
Trypsin inhibitor	Sigma Aldrich	T9003
Collagenase XI	Sigma Aldrich	C0130
Nylon mesh	BD Falcon	352360	70-100µm
Amylase infinity reagent	Thermo	TR25421
CCK	Sigma Aldrich	C2175
FM4-64	Lifetechnologies	F34653	Diluted to 16µM
20mL scintillation vial	Sigma Aldrich	Z190527
DeltaVision system	Applied Precision		Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)
Zeiss 510 or 710 confocal microscope	Zeiss		60x/1.4 or 100x/1.4 objectives
Ultra Microplate reader	BioTek	ELx808