评估胰腺腺泡细胞的分泌能力
Summary
孤立的胰腺腺泡保留其在体内的形态和活动，并提供强大的方式进行监控和操作的分泌。这项工作表明如何腺泡可以从小鼠胰腺中分离出来，并且其分泌能力如何进行评估。
Abstract
胰腺腺泡细胞产生和分泌的消化酶。这些细胞被组织成一个集群形成和股关节腔内。这项工作表明了这些细胞的分泌能力可以通过分离的腺泡的培养来评估。该设置是有利的，因为分离的腺泡，其保留了完整的胰腺外分泌的许多特征可被操纵和监控的相比更容易在整个动物。胰腺腺泡适当隔离是一个关键要求，以使体外培养将代表腺泡体内自然。该协议演示了如何从小鼠胰腺分离完好腺泡。随后，两个互补的方法来评估胰腺分泌呈现。淀粉酶的分泌试验作为一个全球性的措施，而胰腺分泌的直接成像可以分泌在亚细胞分辨率的表征。总的来说，所述技术presen泰德在这里让实验广谱学习外分泌。
Introduction
外分泌胰腺构成了大部分的哺乳动物胰腺肿块，并致力于生产消化酶1的分泌。外分泌胰腺腺泡中，该功能单元是上皮细胞形成及股关节腔的集群。当激素或神经元的刺激，囊泡充满酶运输到顶端细胞表面，保险丝用它排出它们的内容到管腔1-3。所述分泌的酶，然后通过聚结组导管进入小肠，在那里它们催化的食物分解成的营养成分被排出。
此视频演示如何完好腺泡从整个胰腺被隔离，以及如何其分泌能力进行评估。采用这种设置，胰腺分泌是通过测量淀粉酶刺激后的被释放的相对量进行定量。或者，分泌可活通过使用不同的成像传感器和染料。
胰腺腺泡的离体的设置是有利的，因为分离的腺泡，其保留了完整的胰腺的许多特征，可以被操纵和监控的相比更容易在整个动物4-6。这种设置最初是在上世纪70年代，是因为延长了几个外分泌组织的研究，如唾液和乳腺3-7。值得注意的是，它允许分泌的与这些极化上皮细胞的复杂的细胞组织的干扰最小的研究。
Protocol
Representative Results
Discussion
除了 在体外培养，为外分泌腺分泌的研究替代性设置包括从胰管液的活体显微镜和测量。活体显微镜结果表明在小鼠唾液腺10井进行操作。这个方法可以记录分泌实时的完整动物，但在其分辨率和由所述用于操纵外分泌组织被限制。通过从胰管收集体液评估分泌麻醉大鼠11来实现的。然而，由于胰管插管是极其困难的，这种方法很少使用。
这些设?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这个工作是由来自美国，以色列边防军的赠款，以BS和EDSBS是分子遗传学的希尔达和塞西尔·刘易斯教授主持的一个义不容辞的责任。
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
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