Acini pancréatiques isolés conservent leur morphologie et l'activité in vivo et offrent des moyens puissants pour surveiller et manipuler la sécrétion. Ce travail démontre comment acini peuvent être isolées à partir du pancréas de souris, et la façon dont les capacités de sécrétion peuvent être évaluées.
Les cellules acineuses pancréatiques produisent et sécrètent des enzymes digestives. Ces cellules sont organisées en grappes qui forme et actions une lumière commune. Ce travail démontre comment la capacité de sécrétion de ces cellules peut être évalué par culture de acini isolé. La configuration est avantageuse car acini isolé, qui conservent de nombreuses caractéristiques du pancréas exocrine intact peut être manipulée et contrôlée plus facilement que chez l'animal entier. Une bonne isolation des acini pancréatiques est une condition essentielle pour que la culture ex vivo représentera la nature in vivo des acini. Le protocole démontre comment isoler acini intact par le pancréas de souris. Par la suite, deux méthodes complémentaires pour évaluer la sécrétion pancréatique sont présentés. Le dosage de la sécrétion d'amylase sert de mesure global, tandis que l'imagerie directe de la sécrétion pancréatique permet la caractérisation de sécrétion à une résolution de sous-cellulaire. Collectivement, les techniques PresenTed ici permet un large éventail d'expériences pour étudier la sécrétion exocrine.
Le pancréas exocrine qui constitue la majeure partie de la masse du pancréas de mammifère et est dédié à la production et la sécrétion d'enzymes digestives 1. L'unité fonctionnelle du pancréas exocrine, l'acinus, est un amas de cellules épithéliales qui forment et part une lumière commune. Lors de la stimulation hormonale ou des neurones, des vésicules remplies d'enzymes sont transportés à la surface apicale de la cellule, avec le fusible et expulser son contenu dans la lumière de 1 à 3. Les enzymes sécrétées sont ensuite drainés par un ensemble de conduits de coalescence dans l'intestin grêle, où elles catalysent la rupture de l'alimentation en substances nutritives.
Cette vidéo montre comment acini intacts sont isolés de l'ensemble du pancréas et de la façon dont leur capacité de sécrétion peut être évaluée. En utilisant cette configuration, la sécrétion pancréatique est quantifiée en mesurant la quantité relative de l'amylase qui a été publié après la stimulation. En variante, la sécrétion peut être visualisé en temps réel par l'utilisation de différentsdes capteurs et des colorants.
L'ex vivo configuration des acini pancréatiques est avantageuse car acini isolé, qui conservent de nombreuses caractéristiques du pancréas intacts, peut être manipulé et contrôlé plus facilement que chez l'animal entier 4-6. Cette configuration a été développé à l'origine dans la fin des années 1970 et a depuis été étendu à l'étude de plusieurs tissus exocrines telles que la salive et les glandes mammaires 3-7. Notamment, il permet l'étude de la sécrétion minimisant les interférences avec les organisations cellulaires complexes de ces épithéliums polarisés.
En plus de la culture ex vivo, des configurations alternatives pour l'étude de la sécrétion exocrine comprennent microscopie intravitale et la mesure de fluides à partir du canal pancréatique. Microscopie intravitale a été montré pour bien fonctionner dans la souris glandes salivaires 10. Cette méthode permet d'enregistrer en temps réel de la sécrétion dans l'animal intact, mais est limité dans sa résolution et des moyens pour manipuler le tissu exocrine. Évaluation de la s…
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été financé par une subvention de la BSF US-Israël à BS et EDSBS est titulaire d'une chaire Hilda et Cecil Lewis en génétique moléculaire.
ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |