Proteins interact with each other and these interactions determine in a large part their functions. Protein interaction partners can be identified at high-throughput in vivo using a yeast fitness assay based on the dihydrofolate reductase protein-fragment complementation assay (DHFR-PCA).
Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein’s function, regulation and localization often depend on its interactions with other proteins. Here, we describe a protocol for the yeast protein-fragment complementation assay (PCA), a powerful method to detect direct and proximal associations between proteins in living cells. The interaction between two proteins, each fused to a dihydrofolate reductase (DHFR) protein fragment, translates into growth of yeast strains in presence of the drug methotrexate (MTX). Differential fitness, resulting from different amounts of reconstituted DHFR enzyme, can be quantified on high-density colony arrays, allowing to differentiate interacting from non-interacting bait-prey pairs. The high-throughput protocol presented here is performed using a robotic platform that parallelizes mating of bait and prey strains carrying complementary DHFR-fragment fusion proteins and the survival assay on MTX. This protocol allows to systematically test for thousands of protein-protein interactions (PPIs) involving bait proteins of interest and offers several advantages over other PPI detection assays, including the study of proteins expressed from their endogenous promoters without the need for modifying protein localization and for the assembly of complex reporter constructs.
प्रोटीन बातचीत नेटवर्क (पिन) प्रोटीन कार्यात्मक सेल एक में आयोजित कर रहे हैं कि कैसे एक कम संकल्प नक्शा प्रदान करते हैं। प्रत्येक भौतिक दो प्रोटीन के बीच संबंध, या प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत (पीपीआई), इस तरह के प्रोटीन परिसरों के भीतर पाए जाने वाले के रूप में समय में स्थिर है कि एक संघ, का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं और उस सेल के संरचनात्मक संगठन के लिए योगदान करते हैं। ये कनेक्शन भी गतिविधि, स्थिरता, स्थानीयकरण और दो भागीदारों की बातचीत को विनियमित कि क्षणिक संघों का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं। एक दिया प्रोटीन की शारीरिक बातचीत भागीदारों की पहचान इसलिए कि प्रोटीन 2,3 के समारोह और विनियमन पर अमीर जानकारी प्रदान करता है। इन कारणों के लिए, बड़े प्रयासों Escherichia कोलाई 4-6, Arabidopsis thaliana 7, Saccharomyces cerevisiae 8-12, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर <सहित मॉडल जीवों में पिनों की मैपिंग की दिशा में डाल दिया गया है/ उन्हें> 13, Caenorhabditis 14 एलिगेंस और होमो 15 sapiens। इन अध्ययनों प्रोटीन पहले अज्ञात कार्यों के साथ प्रोटीन पर सेल और इस प्रकार महत्वपूर्ण जानकारी में आयोजित कर रहे हैं कि कैसे में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान की है।
कई रणनीतियों पिन अध्ययन करने के लिए पिछले कुछ वर्षों में विकसित किया गया है। इन प्रौद्योगिकियों को मोटे तौर पर (16-18 में समीक्षा) वे PPIs पर प्रदान की गई जानकारी के प्रकार पर आधारित तीन श्रेणियों में बांटा जा सकता है। पहले एक खमीर दो संकर और उसके डेरिवेटिव 19 पर आधारित है। इन प्रौद्योगिकियों द्विआधारी नेटवर्क के निर्माण की अनुमति देता है जो प्रोटीन के जोड़े के बीच प्रत्यक्ष एसोसिएशन, के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं। दूसरा परिवार चारा प्रोटीन की आत्मीयता शुद्धि और ऐसे मास स्पेक्ट्रोमेट्री 20 द्वारा पीछा आत्मीयता शुद्धि के रूप में उनके संबद्ध भागीदारों की पहचान पर आधारित है। इन तरीकों सीधे हैं कि प्रोटीन के समूहों की पहचानया परोक्ष रूप से आम तौर पर एक स्थिर तरीके से जुड़े हैं, और प्रोटीन परिसरों की पहचान करने के लिए अत्यंत शक्तिशाली हैं। तीसरे दृष्टिकोण प्रोटीन-टुकड़ा complementation assays के (PCAs) 11,21 पर आधारित है। यह प्रोटीन के बीच प्रत्यक्ष और समीपस्थ संघों का पता लगाने के लिए अनुमति देता है के रूप में यह दृष्टिकोण, दो पूर्व दृष्टिकोणों के बीच संकल्प की एक मध्यवर्ती स्तर प्रदान करता है। हाल ही में 18 की समीक्षा के रूप में प्रत्येक तकनीक, अपनी शक्तियों और कमजोरियों है।
इसके proteome PPIs के पहले assayed किया गया है पता लगाने के लिए अन्य मॉडल यूकेरियोट्स की और उच्च throughput assays के वजह से उन लोगों की तुलना में अपेक्षाकृत कम जटिल है और अधिक कुशलता से कर रहे हैं क्योंकि सबसे अच्छा वर्णित यूकेरियोटिक पिन भाग में, नवोदित खमीर की अब तक एक के द्वारा होता है इस मॉडल जीव 9-12 में लागू किया है। खमीर प्रणाली के लिए एक विशेष रूप से शक्तिशाली विधि dihydrofolate रिडक्टेस प्रोटीन-टुकड़ा complementation परख (DHFR-पीसीए), कर दिया गया है कि एक परख हैमानक और परेशान शर्तों 11,22-26 में खमीर पिन अध्ययन करने के लिए अलग अलग संदर्भों में इस्तेमाल किया। इस विधि अंतर्जात अभिव्यक्ति के स्तर और एक मात्रात्मक तरीके से 27 में बातचीत भागीदारों 11,21 के देशी subcellular localizations दोनों पर एक दिया चारा प्रोटीन के लिए प्रत्यक्ष और लगभग प्रत्यक्ष PPIs का पता लगाने के लिए सक्षम बनाता है कि एक अस्तित्व परख पर निर्भर करता है। इस परख (उच्च घनत्व कॉलोनी सरणियों पर यानी कॉलोनी आकार) का उपयोग कर प्राप्त संकेत इस प्रकार जंगली प्रकार की कोशिकाओं में से एक के लिए लगभग बराबर एक सेलुलर वातावरण में चारा और शिकार के बीच का गठन प्रोटीन परिसरों की राशि को दर्शाता है। परख फोलेट चयापचय में शामिल एक पत्रकार एंजाइम के पुनर्गठन पर आधारित है, dihydrofolate रिडक्टेस (DHFR), जिससे ब्याज की दो प्रोटीन के लिए जुड़े हुए हैं कि DHFR के दो पूरक टुकड़े दो प्रोटीन, जब बातचीत निकटता में लाया जाता है, जो बदले में एंजाइम गतिविधि 1 की प्रतिवर्ती पुनर्गठन करने के लिए सुरागएक मध्यम युक्त मिथोट्रेक्सेट पर तनाव का एक और विकास (MTX, चित्रा 1)। इस यौगिक अंतर्जात DHFR एंजाइम, लेकिन परख 28 में इस्तेमाल नहीं उत्परिवर्तित एक रोकता। पीसीए उपभेदों के दो संग्रह, जिसमें एक माता के साथ उपभेदों ~ 4300 ओआरएफ DHFR एफ से जुड़े हुए एक [1,2] टुकड़ा और ओआरएफ DHFR [3] टुकड़ा से जुड़े हुए एक, के लिए खरीदा जा सकता है के साथ उपभेदों α ~ 4800 मेट युक्त एक किसी भी प्रयोगशाला में छोटे या बड़े पैमाने पर DHFR-पीसीए को लागू करने। यहाँ, हम एक चारा प्रोटीन और इस परख का उपयोग ~ 4800 शिकार प्रोटीन के बीच PPIs के लिए स्क्रीन करने के लिए एक सामान्य लेकिन विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन है।
हम उच्च throughput पर किसी भी चारा प्रोटीन के लिए शारीरिक interactors के व्यवस्थित पहचान को सक्षम करने DHFR-पीसीए परख के आधार पर एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। इस प्रोटोकॉल अधिक फँसाना के लिए स्क्रीनिंग द्वारा रूपांतरित, और इस प्रतिकृति के किसी भी वांछित स्तर पर किया जा सकता है। हम परमाणु ताकना परिसर में शामिल एक चारा प्रोटीन के लिए शारीरिक बातचीत भागीदारों की पहचान करके इस प्रोटोकॉल की विश्वसनीयता का प्रदर्शन: Nup82। हमारे विश्लेषण खमीर प्रोटीन interactome अध्ययन करने के लिए विधि की क्षमता पर प्रकाश डाला, पांच जैसा कि पहले बताया interactors और एक पहले से unreported interactor (आंकड़े 3F और 3 जी) को खोजने के लिए सक्षम होना चाहिए।
यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल प्रयोगकर्ता ध्यान देना चाहिए, जो करने के लिए कई महत्वपूर्ण कदम भी शामिल है। हम चारा DHFR एफ [1,2] संलयन (चित्रा 1 बी) सही है कि सुनिश्चित कर लें) 1 करने के लिए सलाह देते हैं; इस निर्माण और measur अनुक्रमण के द्वारा प्राप्त किया जा सकता हैएक विरोधी DHFR एफ [1,2] या विरोधी DHFR एफ [3] एंटीबॉडी का उपयोग उचित प्रोटीन अभिव्यक्ति आईएनजी; 2) स्क्रीन शुरू करने से पहले, यह ब्याज की किसी भी प्रलोभन पीसीए स्क्रीन में अनेक बातचीत दर्शाती यदि सत्यापित करने के लिए सिफारिश की है। यह उचित एल DHFR नियंत्रण के साथ या मैन्युअल उपयुक्त एल DHFR नियंत्रण के साथ चारा संभोग और MTX माध्यम में एक विकास परख प्रदर्शन से पार फँसाना के साथ नियंत्रण स्क्रीन प्रदर्शन से किया जा सकता है। वे नमी छपाई की प्रक्रिया के दौरान अगर सतह पर सेल पालन के लिए इष्टतम है इतना है कि इस्तेमाल कर रहे हैं इससे पहले 3) प्लेट्स दिन डाला जाना चाहिए; 4) स्रोत प्लेटें गंतव्य थाली पर पर्याप्त कोशिकाओं को हस्तांतरण करने के लिए चार से अधिक बार इस्तेमाल नहीं किया जाना चाहिए। गंतव्य थाली की प्रतियों की संख्या बढ़ाने से विस्तार की लगातार कदम (-> 16 प्रतियां -> 64 प्रतियां जैसे चार प्रतियां) द्वारा किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, कोशिकाओं लॉन पर या प्रतिकृति के विभिन्न दौर के बीच कॉलोनी में विभिन्न पदों पर चुना जा सकता है; 5) यदि कई Positions द्विगुणित चयन (एस), स्रोत प्लेटें संभोग चरण में भी कई बार इस्तेमाल नहीं किया गया है कि यह सुनिश्चित कर लें के बाद याद कर रहे हैं (4.5-4.7 कदम); 6) MTX मध्यम सही सांद्रता में सभी आवश्यक सामग्री शामिल है कि सुनिश्चित करें। सभी में कोई वृद्धि MTX माध्यम पर मनाया जाता है यदि वास्तव में, यह हो सकता है या तो कोई बातचीत हित के प्रोटीन के लिए या MTX मध्यम ठीक से तैयार नहीं किया गया था क्योंकि पीसीए द्वारा detectable है। मध्यम DHFR complementation टुकड़े दिखा उपभेदों के विकास की अनुमति देता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए, एक विधान बातचीत संग्रह के खाली पदों पर जोड़ा जाता है और इस तरह के leucine जिपर moieties 33 (चित्रा 1C) से जुड़े हुए DHFR-टुकड़े के रूप में एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। संयोजक-DHFR टुकड़े या जिपर-संयोजक-DHFR टुकड़े का उपयोग कर समानांतर परीक्षण Descr के रूप में, झूठी सकारात्मक बातचीत बनाने के लिए करते हैं कि सभी कोशिकाओं को विकसित करने के लिए अनुमति की स्थिति है कि (कम MTX एकाग्रता या चारा प्रोटीन के बीच भेदभाव करने की अनुमति देगानीचे ibed) और सभी उपभेदों के विकास (MTX एकाग्रता बहुत अधिक या अनिवार्य अंग माध्यम में लापता) को रोकने की स्थिति है कि; उदाहरण के लिए, पिन उपकरण प्रतिकृति राउंड और / या आखिरी पानी के बीच ठीक से निष्फल नहीं है, अगर 7) पीसीए दूसरे के लिए एक मध्यम से अनुकरण के लगातार राउंड के माध्यम से किया जाता है यह देखते हुए कि, अलग प्लेटों के बीच उपभेदों के बीच पार संदूषण को हो सकती है नसबंदी प्रक्रिया में स्नान (यानी गीला स्टेशन) पिछले प्रतिकृति दौर की कालोनियों से दूषित कर रहा है। सरणियों पर कई पदों खाली हैं और इस तरह कोई विकास नहीं पार संदूषण का पता लगाने में मनाया जाना चाहिए जहां नियंत्रण के पदों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
छवि विश्लेषण कई प्रकाशित सॉफ्टवेयर्स (प्रोटोकॉल की धारा 5 देखें) या किसी भी कस्टम स्क्रिप्ट का उपयोग किया जा सकता है। 1) स्क्रिप्ट सह करने के क्रम में प्रत्येक थाली के मूल्यों पिक्सेल के लिए एक खाली थाली के पिक्सेल मूल्यों को घटा: इस अध्ययन में, कस्टम स्क्रिप्ट निम्न चरणों को कार्यान्वितरोशनी पूर्वाग्रहों के लिए rrect। 2) स्क्रिप्ट बढ़त कालोनियों पर एक आयत overlaying द्वारा निर्धारित प्रत्येक थाली में से प्रत्येक के 1536 पदों के लिए) 10. 3 के एक पिक्सेल मूल्य दहलीज का उपयोग कर द्विआधारी करने के लिए प्रत्येक पृष्ठभूमि सही तस्वीर बदल देता है, स्क्रिप्ट ImageJ "कणों का विश्लेषण करें रन … एक परिपत्र चयन में "समारोह। परिपत्र चयन दो पदों पर शून्य से 10 पिक्सल के बीच के अंतराल के बराबर एक त्रिज्या के साथ स्थापित किया जाएगा। 4) स्क्रिप्ट चयन के केंद्र से निकटतम कण का चयन करता है और उसके स्थान दो कालोनियों के बीच नहीं आधे से अधिक अंतराल दूर चयन के केंद्र से अगर एक कॉलोनी के रूप में यह पुष्टि करता है। 5) स्क्रिप्ट पृष्ठभूमि सही तस्वीर पर चयनित कण के पिक्सेल मूल्यों के उपाय। 6) आगे किसी भी शेष पृष्ठभूमि रोशनी पूर्वाग्रहों को ठीक करने के लिए स्क्रिप्ट कॉलोनी के पिक्सेल मूल्यों के लिए एक कण का हिस्सा नहीं थे कि परिपत्र चयन से सभी पिक्सल का मतलब मूल्य को घटा देती है। इन सुधारा पिक्सेल मूल्य का योगपूरक 1 टेबल का स्तंभ "IntDenBackSub" में संग्रहित है, कॉलोनी आकार का एक उपाय के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं।
विश्लेषण भाग के भीतर एक महत्वपूर्ण कदम महत्व दहलीज की पसंद है। यहाँ, हम नकारात्मक एल DHFR एफ [3] नियंत्रण के वितरण पर आधारित एक सीमा से चुना है, लेकिन स्क्रीन के उद्देश्य पर निर्भर करता है, इस तरह की दहलीज भी कठोर हो सकता है। पूरक टुकड़े अनायास एक दूसरे के पूरक हो सकता है और इन इस प्रकार सबसे अधिक प्रोटीन की अभिव्यक्ति के प्रतिनिधि नहीं हैं कि दरअसल, एल DHFR एफ [3] नियंत्रण overexpressed कर रहे हैं (मजबूत TEF प्रमोटर) इस तरह के। इस एल-DHFR एफ के वितरण [3] नियंत्रण पृष्ठभूमि विकास (चित्रा 3 डी) के औसत से अधिक है कि इस तथ्य से प्रकाश डाला है। इस प्रकार, कुछ इस कड़े सीमा से नीचे के स्कोर होने बातचीत लेकिन उस पृष्ठभूमि विकास वितरण के बाहर स्पष्ट रूप से कर रहे हैं उदाहरण के लिए, क्षणिक या कमजोर इंटर के लिए प्रतिनिधित्व कर सकते हैं कि ख्यात मारता है, के रूप में माना जा सकता हैकार्रवाई। ये आगे का अध्ययन किया जा सकता है और उदाहरण के लिए, दो प्रोटीन एल DHFR नियंत्रण जैसे DHFR टुकड़े की सहज complementation अनुमति दे सकते हैं कि स्तर पर व्यक्त नहीं कर रहे हैं, अगर पार पुष्टि। एक विकल्प के रूप में, एक झूठी सकारात्मक से अधिक सच सकारात्मक का अनुपात को अधिकतम करने के क्रम में BioGRID 35 की तरह डेटाबेस में रिपोर्ट शारीरिक interactors साथ ओवरलैप के अनुपात के आधार पर एक महत्व सीमा निर्धारित कर सकता है। उदाहरण के लिए, ज्ञात भौतिक interactors की संख्या पर्याप्त उच्च नहीं है हालांकि, अगर एल DHFR वितरण के उपयोग के विपरीत, इस विकल्प हमेशा संभव नहीं हो सकता। इसके अलावा, महत्व दहलीज के चुनाव को अंतिम डेटा सेट में झूठी सकारात्मक और झूठी नकारात्मक के अनुपात पर एक प्रभाव है। जैसा कि पहले उल्लेख उदाहरण के लिए, प्रोटीन अत्यधिक प्रचुर मात्रा में है, वास्तव में, अगर किसी भी अन्य पल्स पोलियो टीकाकरण का पता लगाने परख की तरह, झूठी सकारात्मक DHFR-संलयन प्रोटीन के साथ एक प्रोटीन की unspecific बातचीत से परिणाम कर सकते हैं। यहकुछ preys के व्यवस्थित ढंग से इस प्रकार, पीसीए स्क्रीन में सभी चारा प्रोटीन के साथ बातचीत और तथ्य यह है कि द्वारा उदाहरण है, विश्लेषण 11 (जैसे Tef2 और Ade17 और पूरक तालिका 2) से हटा दिया जाना चाहिए। इस समस्या को उचित एल DHFR नियंत्रण के खिलाफ दो संग्रह की एक नियंत्रण पीसीए स्क्रीन नाकाम करने के लिए (एफ [1,2] या एफ [3]) सहज DHFR complementation विशेष परिस्थितियों में किया जा सकता टुकड़े का प्रदर्शन फँसाना और preys की पहचान करने के लिए प्रत्येक स्क्रीन की। एक दिया चारा के समारोह में जाना जाता है इसके अलावा, अगर एक जीन आंटलजी संवर्धन विश्लेषण प्रदर्शन डेटा में आत्मविश्वास बढ़ा सकते हैं। दूसरी ओर, DHFR-पीसीए कई कारणों के लिए झूठी नकारात्मक को जन्म दे सकते हैं: 1) सभी प्रोटीन इन प्रोटीनों को अस्थिर या अगर उदाहरण के लिए, उनके स्थानीयकरण संशोधित कर सकते हैं के रूप में DHFR टुकड़े करने के लिए इनकार किया जा सकता है नहीं, करने के लिए DHFR संलयन सी टर्मिनस एक स्थानीयकरण संकेत के साथ हस्तक्षेप; कुछ सेलुलर डिब्बों मीटर में 2) DHFR पुनर्गठनउदाहरण के लिए, फोलेट संश्लेषण के लिए एक आवश्यक अग्रदूत उपलब्ध नहीं है, अगर प्र फोलेट का उत्पादन नहीं; DHFR complementation 11 घटित करने के लिए 3) सी-टर्मिनी की जरूरत 8 एनएम की दूरी के भीतर हो। उनकी सी टर्मिनी अंतरिक्ष में पर्याप्त बंद नहीं कर रहे हैं, इस प्रकार, यदि एक प्रसिद्ध बातचीत नहीं पाया जा सकता है। यह अप्रत्यक्ष कर रहे हैं, जिनमें से अधिकांश डेटाबेस, में सूचना दी Nup82 शारीरिक बातचीत का एक बड़ा अंश, हमारे परख में नहीं पाया गया है कि इस तथ्य से यहाँ उदाहरण है। DHFR complementation टुकड़े और 11 पता नहीं होगा करने के लिए इसी प्रकार, सी-टर्मिनी झिल्ली को पार सापेक्ष में हैं जिसके लिए झिल्ली प्रोटीन के बीच बातचीत का नेतृत्व नहीं करेंगे। सीमाएं 1) और 3) प्रोटीन के एन टर्मिनी को DHFR टुकड़ा fusing द्वारा अपेक्षाकृत बस उन्हें धोखा दिया जा सकता है। इतनी सी Termini के निकट एक स्थानीयकरण संकेत के साथ हस्तक्षेप करने के लिए रोक सकता है और जिसका झिल्ली प्रोटीन और एन सी टर्मिनस के बीच एक संवाद का पता लगाने के लिए अनुमति दे सकता सीआईएस सापेक्ष में कर रहाझिल्ली को।
कई चुनौतियों (2,3 में समीक्षा) पिन के अध्ययन में रहते हैं। अब तक का उत्पादन पिन के नक्शे काफी हद तक प्रत्येक प्रजाति के लिए एक एकल प्रायोगिक हालत में वर्णित किया गया है और इस तरह प्रोटीन नेटवर्क का आयोजन किया जा सकता है की एक एकल स्नैपशॉट की पेशकश की है। पिन विकास या निम्न म्यूटेशन भर में पर्यावरण परिवर्तन, विशिष्ट उत्तेजनाओं, के जवाब में पुनर्गठित किया जा सकता है देखने के लिए कैसे अन्य प्रयोगात्मक शर्तों के अन्वेषण के लिए एक की जरूरत इसलिए नहीं है। इन चुनौतियों जीवित कोशिकाओं में वास्तविक समय में PPIs पूछताछ के लिए नई प्रौद्योगिकियों के विकास के द्वारा और वे प्रयोगशालाओं का एक बड़ा समुदाय द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता है, ताकि मौजूदा तकनीक आदत डाल द्वारा दूर किया जाएगा। DHFR complementation की राशि में परिवर्तन का पता लगा सकते हैं कि एक मात्रात्मक तकनीक 27 परिसरों के रूप में, DHFR-पीसीए इन चुनौतियों पर काबू पाने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और PPIs के एजेंट 22 को नुकसान पहुँचाए एक डीएनए से प्रभावित कर रहे हैं कि कैसे अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है </sup>, रासायनिक एजेंट 25, जीन विलोपन 23,26 या अन्य खमीर प्रजातियों में और उनके संकर 33। इन नए आयामों की खोज पिन के गतिशील प्रकट करने के लिए अधिक से अधिक महत्वपूर्ण हो जाएगा।
The authors have nothing to disclose.
इस काम कनाडा के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (CIHR) 191,597, 299,432 और 324,265, अनुदान द्वारा समर्थित किया गया एक प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा डिस्कवरी अनुदान के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल और सीआरएल करने के लिए एक मानव फ्रंटियर विज्ञान कार्यक्रम अनुदान। सीआरएल एक CIHR नई अन्वेषक है। Guillaume Diss एक Proteo फैलोशिप द्वारा समर्थित है। सैमुअल Rochette NSERC और FRQNT फैलोशिप द्वारा समर्थित है।
Name of Material/Equipement | Company | Catalog Number | Comments/Description |
BioMatrix Robot, Bench-top Configuration | S&P Robotics Inc. | BM5-BC | |
96-format Pin-tool | S&P Robotics Inc. | PH-96-10 | Standard 96-format Pin-tool with 96 high-precision floating pins |
384-format Pin-tool | S&P Robotics Inc. | PH-384-10 | Standard 384-format Pin-tool with 384 high-precision floating pins |
1536-format Pin-tool | S&P Robotics Inc. | PH-1536-05 | Custom 1536-format Pin-tool with 0.5mm high-precision floating pins |
Automated imaging module | S&P Robotics Inc. | IMG-02 | |
Methotrexate | Bioshop Canada Inc. | MTX440 | CAUTION: toxic compound |
Hygromycin B | Bioshop Canada Inc. | HYG003 | |
Nourseothricin dihydrogen sulfate | Werner BioAgents | 5010000 | |
Yeast-Interactome Collection | Thermo Scientific | YSC5849 | |
Omni Tray w/lid sterile | Thermo Scientific | 242811 | |
Anti-DHFR F[1,2] antibody | Sigma-Aldrich | D1067 | |
Anti-DHFR F[3] antibody | Sigma-Aldrich | D0942 |