Abstract
मानव हृदय संबंधी विकार है कि नकल पशु मॉडलों संभावित चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए बनाया गया है। इन रणनीतियों का मूल्यांकन करने के लिए एक प्रमुख घटक दिल समारोह पर उनके प्रभाव की जांच करने के लिए है। विवो हृदय यांत्रिकी (जैसे, इकोकार्डियोग्राफी, दबाव / मात्रा संबंधों, आदि) में मापने के लिए कई तकनीकें हैं। इकोकार्डियोग्राफी की तुलना में, कैथीटेराइजेशन के माध्यम से वास्तविक समय बाएं निलय (एल.वी.) के दबाव / मात्रा विश्लेषण एल.वी. समारोह का आकलन करने में और अधिक सटीक और व्यावहारिक है। इसके अतिरिक्त, एल.वी. दबाव / मात्रा विश्लेषण तत्क्षण सिकुड़ना (जैसे, β एड्रीनर्जिक उत्तेजना) और रोग अपमान (जैसे, ischemia / reperfusion की चोट) की जोड़तोड़ के दौरान परिवर्तन रिकॉर्ड करने की क्षमता प्रदान करता है। अधिकतम करने के अलावा, (+ डी पी / डीटी) और न्यूनतम (-dP / डीटी) एल.वी. में दबाव परिवर्तन की दर, कई लोड-स्वतंत्र अनुक्रमित के माध्यम से एल.वी. समारोह का सही आकलन (जैसे, अंत सिस्टोलिक दबावमात्रा रिश्ते और प्रीलोड recruitable स्ट्रोक काम) प्राप्त किया जा सकता है। हार्ट दर दिल की दर में वृद्धि के कार्डियक आउटपुट (यानी, Bowditch 'प्रभाव) को बढ़ाने के लिए प्राथमिक तंत्र है कि इस तरह के एल.वी. सिकुड़ना पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है। प्रयोगात्मक समूहों के बीच hemodynamics की तुलना करते समय इस प्रकार, यह इसी तरह की दिल की दर के लिए आवश्यक है। इसके अलावा, कई कार्डियोमायोपैथी मॉडल की एक बानगी सिकुड़ा रिजर्व में कमी है (यानी, Bowditch 'प्रभाव में कमी आई)। नतीजतन, महत्वपूर्ण जानकारी सिकुड़ना पर दिल की दर में वृद्धि के प्रभाव का निर्धारण करने के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है। हमारी और दूसरों डेटा न्यूरोनल नाइट्रिक ऑक्साइड सिन्थेज़ (NOS1) पीटकर माउस सिकुड़ना कमी आई है कि प्रदर्शन किया है। यहाँ हम NOS1 पीटकर माउस मॉडल का उपयोग कर दिल की दरों में वृद्धि के साथ एल.वी. दबाव / मात्रा को मापने की प्रक्रिया का वर्णन।
Introduction
दिल का उद्देश्य जीव की चयापचय की मांग को पूरा करने के लिए पूरे शरीर में रक्त पंप करने के लिए है। इन मांगों को लगातार (अभ्यास के दौरान जैसे,) अस्थिर कर रहे हैं के बाद से, दिल (यानी, हृदय उत्पादन में वृद्धि) अनुकूलन करना चाहिए। दिल यह उपलब्धि हासिल करने के लिए कई रास्ते तैयार कर लिया गया है। दिल इस को प्राप्त होता है प्रधानमंत्री तरीके से दिल की दर में वृद्धि हुई है (यानी, Bowditch 'प्रभाव) 1 के जरिए होता है। यही कारण है कि किसी के दिल की दर बढ़ जाती है, इस सिकुड़ना में वृद्धि हुई है और हृदय उत्पादन में वृद्धि में यह परिणाम है। इस प्रकार, दिल समारोह दिल की दर पर बेहद निर्भर है। दुर्भाग्य से, दिल की बीमारी (जैसे, रोधगलन, अतिवृद्धि, आदि) गरीब दिल समारोह में जो परिणाम में दिल फलस्वरूप शरीर की चयापचय की मांग को पूरा करने में सक्षम नहीं होगा। दिल की बीमारी पश्चिमी समाज में रुग्णता और मृत्यु दर का मुख्य कारण है। कई मानव cardiomy पुनरावृत्ति कि पशु मॉडलopathies आणविक तंत्र की जांच करने के लिए और संभावित उपचारों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। एक चिकित्सा व्यवहार्य हो सकता है अगर इन तंत्रों विचार और निर्धारित करते हैं, जांचकर्ताओं विवो में दिल समारोह का आकलन करना चाहिए।
हालांकि, इन मापदंडों afterload, प्रीलोड, और हृदय की दर पर बहुत निर्भर कर रहे हैं नियमित रूप से इंजेक्शन फ्रैक्शन उपाय जो vivo में दिल समारोह का आकलन करने के लिए कई तरीके (जैसे, इकोकार्डियोग्राफी, एमआरआई, आदि), आंशिक छोटा करने, कार्डियक आउटपुट, आदि कर रहे हैं सिकुड़ना 2 के अलावा। सिकुड़ना मापने इसके मूल वातावरण में दिल के आंतरिक गुणों को समझने के लिए अपरिहार्य है। दबाव विकास की अधिकतम (डी पी / डीटी अधिकतम) की दर एक कदम और करीब सिकुड़ना को समझने के लिए हमें लाता है। दुर्भाग्य से, डी पी / डीटी भी हृदय गति और लदान की स्थिति 3 पर निर्भर है। इसलिए तकनीक बेल देखते हैं, लोड (और हृदय की दर को मापने के लिए विकसित किया गया हैओउ) मायोकार्डियल सिकुड़ना के स्वतंत्र सूचकांक (यानी, अंत सिस्टोलिक दबाव मात्रा रिश्ता (ESPVR) और प्रीलोड recruitable स्ट्रोक काम (PRSW)) 4-6। ESPVR किसी भी एल.वी. मात्रा में निलय द्वारा विकसित किया जा सकता है कि अधिक से अधिक दबाव का वर्णन है। ESPVR की ढलान अंत सिस्टोलिक elastance (Ees) का प्रतिनिधित्व करता है। PRSW अंत डायस्टोलिक मात्रा के साथ स्ट्रोक काम (पीवी पाश से घिरा क्षेत्र) के रेखीय प्रतिगमन है। इन प्रक्रियाओं में इस तरह के इंजेक्शन फ्रैक्शन, कार्डियक आउटपुट, और स्ट्रोक मात्रा के रूप में hemodynamic मापदंडों की तुलना में सिकुड़ना के एक अधिक सही और सटीक माप कर रहे हैं। ESPVR और PRSW अवर रग Cava (आईवीसी) के अस्थायी अवरुद्ध के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है। आईवीसी अवरुद्ध दिल समारोह पर intrapleural दबाव बदलने के प्रभाव से बचने के लिए एक बंद छाती के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है।
बढ़ाने से दिल की दर भी संकुचन और 1 को बढ़ाता है। इस प्रकार, जब experimenta के बीच दिल समारोह की तुलनाएल समूहों (जैसे, ± डी पी / डीटी), दिल की दर समान होने की जरूरत है। हालांकि, इसी तरह दिल दर आम तौर पर होने के कारण विभिन्न शर्तों (रोग, अनुसंधान हस्तक्षेप, आदि) के लिए प्रत्येक जानवर में नहीं होती है। यह (इंजेक्शन और साँस) संज्ञाहरण दिल की दर को कम करती है कि ध्यान दिया जाना चाहिए। दिल की दर सिकुड़ना का एक प्रमुख निर्धारक है, संज्ञाहरण काफी सिकुड़ना को प्रभावित करेगा। इस कारण से, हम अपने प्रक्रिया का वर्णन कर रहे हैं। इसके अतिरिक्त, कई cardiomyopathies की एक बानगी है (यानी, एक कम Bowditch 'प्रभाव) एक कम सिकुड़ा आरक्षित है। इसलिए, दिल समारोह दिल की दरों की एक सीमा से अधिक मापा जाना चाहिए। यहाँ हम इन प्रभावों को प्राप्त करने के लिए (एक बंद छाती) के साथ एक उत्तेजक उपयोग करने के लिए क्या करते हैं।
दिल की दर के अलावा, नाइट्रिक ऑक्साइड (सं) भी सिकुड़ना 7 के एक महत्वपूर्ण न्यूनाधिक है। सं एंजाइमों के माध्यम से कोई सिन्थेज़ (ओपन स्कूल) करार दिया निर्मित है। हम और दूसरों को न्यूरोनल ओपन स्कूल की पीटकर साथ कि चूहों (NOS1 से पता चला है
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Protocol
नोट: इस जानवर प्रोटोकॉल ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया था। यह प्रक्रिया कैरोटिड धमनी के भीतरी व्यास कैथेटर डालने के लिए काफी बड़ी है, जिसमें किसी भी माउस पर इस्तेमाल किया जा सकता है। 16 जी (पुराने 2 ~ माह से अधिक) से ऊपर हैं कि चूहों का उपयोग करें।
1. कैथीटेराइजेशन के लिए माउस की तैयारी
- बंध्याकरण पाउच में सभी सर्जिकल उपकरणों और आपूर्ति सील। एक आटोक्लेव मशीन में थैली जीवाणुरहित। प्रक्रिया के दौरान एक बाँझ क्षेत्र बनाए रखें और बाँझ दस्ताने पहनते हैं।
- Intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा ketamine (55 मिलीग्राम / किग्रा) से अधिक xylazine (15 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ चूहों anesthetize।
नोट: पूरी प्रक्रिया के विभिन्न दिल दरों पर दोनों दबाव / मात्रा को मापने और ESPRV कम से कम 20 मिनट लगते हैं। अतिरिक्त समय की आवश्यकता है (यानी, 30 मिनट से अधिक), संज्ञाहरण के एक अतिरिक्त एक चौथाई खुराक हर 30 मिनट दे। - पूर्वकाल r में बाल निकालेंऔर बालों को हटाने लोशन (जैसे, नायर) का उपयोग कर गर्दन और छाती क्षेत्र के egion फोम मंच पर माउस के अंगों टेप। एक पैर के अंगूठे चुटकी से गहरी संज्ञाहरण के एक राज्य की पुष्टि करें।
- शरीर का तापमान (37 ± 1 डिग्री सेल्सियस) पर नजर रखने के लिए, और (सर्जिकल कपड़ा और प्लेटफार्म के बीच स्थित है) एक थर्मो-विनियमित हीटिंग पैड का उपयोग कर बनाए रखने के लिए एक गुदा जांच डालें।
- 4-0 सीवन (~ 10 सेमी) की लंबाई तैयार करें। मंच करने के लिए लूप ऊपरी incisors चारों ओर सिवनी और टेप। यह गर्दन सीधे रखेंगे।
- Betadine और 75% शराब के तीन बार के साथ क्षेत्र swabbing द्वारा शल्य चिकित्सा के क्षेत्र जीवाणुरहित।
2. कैथीटेराइजेशन
- कम से कम 30 मिनट के लिए खारा में टिप या आसुत जल (37 डिग्री सेल्सियस) presoaking द्वारा कैथेटर की तैयारी गीला जैविक पर्यावरण के लिए दबाव सेंसर डायाफ्राम acclimate करने के लिए (निर्माता के निर्देशों के अनुसार) का उपयोग करने के लिए और दबाव संकेत बहाव और नकारात्मक रोकने के लिए पूर्व दबाव रिकॉर्डिंग।
- गर्दन के पूर्वकाल क्षेत्र में निचले जबड़े और उरोस्थि के बीच एक अनुदैर्ध्य 0.8 सेमी चीरा बनाओ। ठीक कैंची के साथ, stemohyoideus पेशी के अंतर्गत स्थित श्वासनली को बेनकाब करने के लिए त्वचा पेशी संयोजी ऊतक अलग।
- सही मन्या धमनी बेनकाब करने के लिए घुमावदार संदंश के साथ श्वासनली के सही पक्ष में वसा और मांसपेशियों के ऊतकों को अलग करें।
नोट: मन्या धमनी, गर्दन के पूर्वकाल क्षेत्र में सबसे बड़ी धमनी है चमकदार लाल रक्त होता है, और गुणवाला है। कैरोटिड धमनी के समानांतर चलता है कि गले नस के साथ भ्रमित मत करो। गले नस गहरे लाल और गैर गुणवाला है। इसके अलावा, मन्या धमनी के अलगाव के दौरान, उपयोगकर्ता pneumogastric तंत्रिका हानिकारक नहीं के बारे में पता होना चाहिए। - घुमावदार संदंश के साथ सही मन्या धमनी से चर्बी हटाने। इस संचालन तकनीक रोकना होगा जो पोत की शाखाओं में वहाँ मौजूद है, मन्या धमनी अलग कर देना करने के लिए एक Bovie दाग़ना के साथ उन्हें काट दिया।घुमावदार संदंश का उपयोग कैरोटिड धमनी के तहत संभव के रूप में ऊतक के रूप में ज्यादा अलग करें।
- दो 5 सेमी 6-0 रेशम के धागे काटें। सही मन्या धमनी के तहत प्रत्येक रेशम के धागे से गुजरती हैं।
- स्थिति एक समीपस्थ भाग के पास धागा और धमनी के बाहर का हिस्सा पास अन्य। बाहर का भाग पर धागा पर एक तंग गाँठ बनाओ, और समीपस्थ भाग पर धागा पर एक ढीला गाँठ बनाने के।
- एक छोटे से hemostat के संवहनी दबाना का उपयोग धमनी के समीपस्थ हिस्सा clamping द्वारा रक्त के प्रवाह को ब्लॉक (समीपस्थ धागा नीचे दबाना जगह)। धमनी की सील क्षेत्र रक्त यह आसान कदम 2.8 प्रदर्शन करने के लिए बनाने के साथ भरा जाएगा।
- एक 26 जी सुई के साथ दो धागे (लेकिन बाहर का धागा के करीब) के बीच सही मन्या धमनी में एक छोटा सा छेद पंचर। कैरोटिड धमनी में कैथेटर डालें। थोड़ा जगह में रखने के लिए कैथेटर पर मन्या धमनी के समीपस्थ भाग पर ढीली गाँठ कस लें।
नोट: सुई पंचर का प्रयोग तुलना में पसंद किया जाता हैकैंची चीरा करने के लिए। समीपस्थ हिस्सा पहले धमनी के बाहर के हिस्से में एक तंग गाँठ बना रही है, और फिर clamping करके, धमनी पूरी तरह खून से भर जाएगा। यह बहुत आसान रक्त वाहिका के माध्यम से प्रहार करने के लिए बनाता है। इसके अलावा, सुई (26 जी) के आकार को अच्छी तरह से कैथेटर के आकार फिट बैठता है कि एक छेद के साथ धमनी punctures। कैंची चीरा विधि का उपयोग करते हैं, तो यह चीरा के आकार को नियंत्रित करने के लिए और अधिक कठिन था। जिस पर एक सर्जन के साथ अधिक सहज महसूस करता है पर फिर भी, चुने हुए विधि निर्भर होना चाहिए। - चरण 3 में के रूप में दबाव संकेतों रिकॉर्डिंग शुरू करो।
- Hemostat दबाना ढीला और बाएं वेंट्रिकल में आगे कैथेटर डालने जारी है। कैथेटर को आगे बढ़ाने के लिए जब कुछ प्रतिरोध का अनुभव किया जाता है, तो धीरे इसे वापस खींचने के लिए और फिर से आगे बढ़ाने के लिए प्रयास करें। ~ 18-25 ग्राम वजन एक माउस के लिए, डाला जाता है कि कैथेटर की अनुमानित लंबाई 18 मिमी है।
नोट: धमनी दबाव संकेत 70 से 120 एमएम एचजी के लिए उतार चढ़ाव हो जाएगा। एक बार टीवह कैथेटर बाएं वेंट्रिकल में दबाव संकेत परिवर्तन के आकार है और दबाव में 0 से 120 मिमी (चित्र 1 में दिखाया गया है) पारा करने के लिए उतार चढ़ाव हो जाएगा। दिल समारोह कैथेटर की प्रविष्टि के बाद 2-3 मिनट के भीतर स्थिर होगा। - लगातार शरीर का तापमान, संज्ञाहरण के स्तर पर, और सांस लेने की दर को मॉनिटर।
3. डाटा अधिग्रहण
- का प्रयोग करें LabChartPro 7 सॉफ्टवेयर (या इसी तरह के सॉफ्टवेयर)। पीवी लूप LabChart मॉड्यूल के कार्यप्रवाह विकल्प का प्रयोग करें। इस मॉड्यूल का उपयोग करना, दबाव और मात्रा लूप्स डिफ़ॉल्ट सेटिंग का चयन करें।
- सेट-अप तीन चैनलों: दबाव के लिए एक चैनल, मात्रा के लिए एक चैनल है, और दिल की दर के लिए एक चैनल। 0-150 मिमी पारा, क्रमश: 0-100 μl और 0-800 हरा / मिनट, ऊपर के रूप में पैरामीटर के सेट पैमाने पर्वतमाला।
- रिकॉर्ड करने के लिए शुरू प्रेस कुंजी।
4. Bowditch 'प्रभाव
- Manubrium को precordium क्षेत्र समानांतर में एक 1 सेमी चीरा बनाओ। मांसपेशियों और विस्तार की परत में कटौतीपसलियों के बीच अंतरिक्ष ose कैंची का उपयोग।
- , 2 वी के वोल्टेज 2 मिसे की अवधि, और दोहराने मोड सक्षम: एक वर्ग पल्स उत्तेजक का उपयोग करना, निम्नलिखित मानकों की स्थापना की।
- संदंश के साथ नकारात्मक इलेक्ट्रोड पकड़ो और दिल के शिखर क्षेत्र के लिए चौथे पसलियों के बीच अंतरिक्ष के माध्यम से डालें। संदंश के साथ सकारात्मक इलेक्ट्रोड पकड़ो और दिल की सही अलिंद क्षेत्र के लिए दूसरा पसलियों के बीच अंतरिक्ष के माध्यम से डालें।
- उत्तेजक पर मुड़ें और 10 हर्ट्ज (600 धड़कता / मिनट) तक 4 हर्ट्ज (240 धड़कता / मिनट) से हृदय गति आवृत्ति बदल जाते हैं। प्रत्येक नया दिल दर पर, डेटा संग्रह से पहले 1 मिनट के लिए दिल को प्रोत्साहित।
5. ESPVR और PRSW सृजन
- कैंची के साथ उदर क्षेत्र में manubrium सीधा करने के लिए त्वचा और मांसपेशियों के ऊतकों काटें। Enterocoelia खोलें और जिगर को बेनकाब।
- धातु कर्षण का उपयोग कर सिर की ओर ARCUS costarum खींचें।
- धीरे से नीचे की ओर जिगर धक्काएक कपास झाड़ू। छाती गुहा को प्रभावित करने के लिए बहुत ज्यादा धक्का नहीं है सावधान रहें। यह दिल समारोह बदल जाएगा।
- Suprahepatic अवर रग Cava (आईवीसी) को बेनकाब करने के लिए कैंची से जिगर की दात्राकार बंधन कट।
- तेजी से सही आलिंद के लिए रक्त की वापसी को ब्लॉक करने के लिए 5 सेकंड के लिए आईवीसी निचोड़ करने के लिए घुमावदार संदंश का प्रयोग करें। बाएं निलय दबाव और मात्रा के कारण दिल के लिए कम आमद के लिए गिर जाएगी। इन मूल्यों को पैदा करने में, 60 एमएम एचजी से नीचे छोरों का उपयोग नहीं करते। 60 एमएम एचजी सिस्टोलिक दबाव के संदर्भ में है।
नोट: यह काफी कोरोनरी छिड़काव कम होती है और सिकुड़ना को प्रभावित करने के लिए छिड़काव दबाव में उल्लेखनीय गिरावट का कारण होगा, क्योंकि यह मान 60 एमएम एचजी पर सेट किया जाता है।
6. वॉल्यूम कैलिब्रेशन
- Intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा (सामान्य नमक के साथ पतला) 5,000 हेपरिन समाधान: 1 के 0.1 मिलीलीटर के साथ माउस Heparinize।
- कैरोटिड धमनी से कैथेटर निकालें। कैथेटर fr के बाहर खींच लिया हैओम मन्या धमनी, heparinized रक्त कैथेटर डाला गया था, जहां छेद से रिसना जाएगा।
- 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग मात्रा अंशांकन के लिए इस खून ले लीजिए। अंशांकन क्युवेट में अच्छी तरह से प्रत्येक भरें।
- Exsanguination के माध्यम से माउस euthanize को दिल निकालें।
- अच्छी तरह से प्रत्येक में कैथेटर स्थिति और एक स्थिर सापेक्ष मात्रा इकाई (RVU) मूल्य मिलता है। प्रत्येक अच्छी तरह से विभिन्न मानक मात्रा और RVU मूल्यों का उपयोग एक मानक वक्र उत्पन्न करता है।
- दर्ज की गई RVU μl कन्वर्ट करने के लिए।
7. डाटा प्रोसेसिंग
- Bowditch 'प्रभाव की जांच करने के लिए, हर दिल की दर से स्थिर राज्य दबाव / मात्रा निशान का चयन करें। डेटा प्राप्त करने के लिए आधारभूत विश्लेषण पर क्लिक करें।
- ESPVR और PRSW डेटा के लिए, पहली ~ 15 दबाव / मात्रा निशान चयन ESPVR और PRSW (अंत डायस्टोलिक मात्रा में एल.वी. द्वारा विकसित दबाव के ढलान) (स्ट्रोक काम के रेखीय प्रतिगमन उत्पन्न करने के लिए सॉफ्टवेयर में रोड़ा विश्लेषण क्लिक करें अंत डायस्टोलिक साथमात्रा) ढलानों।
- छोरों के आकार पर ध्यान दीजिए। पाश कोई कोणीय अंक या twists के साथ बंद कर दिया है सुनिश्चित करें। यह अनुचित कैथेटर नियुक्ति या अतिरिक्त शोर का एक संकेत है। समय-समय पर उचित दबाव और मात्रा डेटा उत्पन्न किया जा रहा है सुनिश्चित करने के लिए प्रयोग के दौरान छोरों की जाँच करें।
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Representative Results
बाएं वेंट्रिकल में कैथेटर की उचित प्रविष्टि उचित दबाव और मात्रा मूल्यों को प्राप्त करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। LabChart प्रो 7 का उपयोग कर, चित्र 1 में दिखाया, कैथेटर वेंट्रिकल में धमनी से चला जाता है के रूप में दबाव तरंग (आकार और मान) के बदलते है।
बाएं वेंट्रिकल में कैथेटर की उचित प्रविष्टि के बाद, दबाव (पी) और मात्रा (वी) तो पीवी छोरों उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा प्राप्त मूल्यों (चित्रा 2 में दिखाया गया है)।
इन दबाव मूल्यों का प्रयोग, सिकुड़ना बदल तंत्र है कि जांच की जा सकती है। का एक उदाहरण 3 चित्र में दिखाया गया है कि कैसे दबाव और हृदय की दर बढ़ जाती है के रूप में मात्रा में परिवर्तन। डायस्टोलिक और सिस्टोलिक एल.वी. संस्करणों में कमी आई है, जबकि इस उदाहरण में, 300 से 600 के लिए धड़कता से दिल की दर बढ़ रही है / मिनट, एल.वी. दबाव, 80 से 100 एमएम एचजी की वृद्धि हुई। चित्रा 4 में दिखाया दिल की दर है दबाव विकास (डी पी / डीटी) के अधिकतम और न्यूनतम दरों की निर्भरता। दिल की दर बढ़ जाती है, इसलिए दबाव विकास का अधिकतम और न्यूनतम दरों करता है। डेटा विश्लेषण इस प्रकार का भी सिकुड़ना के नियामकों की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। / - - चूहों wildtype (डब्ल्यूटी) चूहों (चित्रा 4) की तुलना में दबाव विकास का अधिकतम और न्यूनतम दरों में कमी आई है हमारे डेटा NOS1 यह दर्शाता है कि। इसलिए, NOS1 की पीटकर एक की कमी हुई Bowditch 'के प्रभाव में यह परिणाम है।
आईवीसी रोड़ा के दौरान प्राप्त दबाव और मात्रा मूल्यों का प्रयोग, हम भी लोड स्वतंत्र सिकुड़ना का एक उपाय हो सकता है। / - - चूहों चित्रा 5 में दिखाया, Ees और PRSW मूल्यों की गणना कर रहे WT और NOS1 के लिए (420 धड़कता / मिनट पर मापा जाता है)। / - - चूहों में कमी आई है सिकुड़ना WT चूहों की तुलना में इन आंकड़ों NOS1 सुझाव देते हैं।
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चित्रा 1:। पीवी लूप LabChart मॉड्यूल का उपयोग करने का पता चला के रूप में दबाव और मात्रा संकेतों दबाव संकेत परिवर्तन कैथेटर एल.वी. में तैनात है। धमनी दबाव संकेत (ऊपर) 80 से 120 एमएम एचजी को fluctuated। कैथेटर बाएं वेंट्रिकल में रखा गया था एक बार, दबाव संकेत परिवर्तन के आकार और दबाव 0 से 120 एमएम एचजी को fluctuated। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: पी.वी. की पीढ़ी PV लूप LabChart मॉड्यूल का उपयोग कर छोरों। बाएं) दबाव (ऊपर), खंड (मध्य) और दिल की दर (नीचे) के प्रतिनिधि डेटा। ये एल.वी. दबाव / मात्रा मूल्यों generat करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैंमात्रा (वी) के खिलाफ दबाव (पी) की साजिश रचने के द्वारा ई पी.वी. पाश। बाईं तरफ डेटा द्वारा उत्पन्न छोरों की (सही) चित्रण। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3:।। एल.वी. दबाव और मात्रा पर दिल की दर का प्रभाव पी.वी. लूप LabChart मॉड्यूल का उपयोग कर दिल की दर में वृद्धि के साथ एल.वी. दबाव और मात्रा में परिवर्तन का प्रदर्शन प्रतिनिधि डेटा इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4: NOS1 पीटकर (NOS1 - / -।) चूहों विवो दिल समारोह और सिकुड़ा रिजर्व में कमी आई है की तुलना में wildtype करने के लिए (डब्ल्यूटी) चूहों, NOS1 - / - चूहों काफी कम अधिकतम (डी पी / डीटी अधिकतम) और न्यूनतम (डी पी / डीटी मिनट) दबाव की दर है बढ़ रही है दिल की दर के साथ विकास। डेटा मतलब ± एसडी के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। * पी <एनोवा, एन = 5 चूहों / समूह के माध्यम से गुम्मट बनाम 0.05।
चित्रा 5: NOS1 पीटकर (NOS1 - / -) चूहों सिकुड़ना में कमी आई है। बाएं) प्रतिनिधि दबाव / अवर रग Cava रोड़ा के दौरान प्राप्त की मात्रा छोरों। प्रत्येक लूप के उचित आकार पर ध्यान दें। मोटी लाइनों अंत सिस्टोलिक दबाव मात्रा रिश्ता (ESPVR) कर रहे हैं। दाएं) wildtype की तुलना में (डब्ल्यूटी) चूहों, NOS1 - / - चूहों एक कम अंत सिस्टोलिक elastance (Ees) और (PRSW recruitable स्ट्रोक काम प्रीलोड)। डेटा मतलब ± एसडी के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। * पी <अयुगल टी परीक्षण, एन = 5 चूहों / समूह के माध्यम से गुम्मट बनाम 0.05।
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Discussion
सिकुड़ना की एक विश्वसनीय उपाय प्राप्त करने के लिए इस तकनीक के लिए एक महत्वपूर्ण कदम एल.वी. में उचित कैथेटर प्लेसमेंट है। एल.वी. ठेके जब कैथेटर, सही ढंग से रखा नहीं है, तो दीवारों अनियमित आकार पीवी छोरों के कारण बहुत अधिक है, और शारीरिक नहीं, दबाव मूल्यों में जिसके परिणामस्वरूप कैथेटर संपर्क कर सकते हैं। यदि आवश्यक हो, कैथेटर सही स्थान हासिल करने के लिए घुमाया जा सकता है। इस तकनीक के लिए एक और महत्वपूर्ण कदम माउस उचित संज्ञाहरण प्राप्त सुनिश्चित करने के लिए है। माउस से anesthetized खत्म हो गया है, तो यह बहुत दिल समारोह में कमी होगी। एक दिल की दर के साथ एक माउस कम ~ 250 धड़कता / मिनट से anesthetized खत्म माना जा सकता है। साथ ही, माउस दिल पंपों कि रक्त की मात्रा यह मुश्किल सटीक संस्करणों पाने के लिए बना छोटा है। यह प्रत्येक माउस के लिए मात्रा जांच करने के लिए महत्वपूर्ण है। मात्रा अंशांकन के लिए, हम क्युवेट अंशांकन तकनीक का वर्णन किया। यानी भी संस्करणों जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है कि अतिरिक्त तरीकों (कर रहे हैं,एक प्रवाह जांच उतरते वक्ष महाधमनी में) 10 का उपयोग कर स्ट्रोक मात्रा गणना।
माउस में इस पद्धति का उपयोग करने के कई सीमाएं हैं; सब की वजह से अपने छोटे शरीर के आकार के। उदाहरण के लिए, इस तकनीक को सही microsurgical कौशल की आवश्यकता है। इसके अलावा, इस तकनीक के संभावित दिल समारोह को बदल सकता है जो कुछ खून की कमी, में यह परिणाम है। बड़े पैमाने पर खून की कमी अन्य तरीकों (जैसे, बाएं वेंट्रिकल puncturing) की तुलना में वाहिका संरचना के माध्यम से कैथेटर को आगे बढ़ाने से बचा जा सकता है। यहाँ, हम इन मुद्दों से बचने के लिए महत्वपूर्ण विवरण के साथ विस्तार से पूरी प्रक्रिया का वर्णन।
दबाव / मात्रा विश्लेषण विवो सिकुड़ना में जांच करने के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है। अन्य प्रजातियों (लागत, आनुवंशिक हेरफेर, आदि) पर कई लाभ कर रहे हैं के बाद से चूहों में इस तकनीक का प्रदर्शन महत्वपूर्ण है। हृदय की दर को दिल समारोह 1 का एक महत्वपूर्ण निर्धारक है और anest से प्रभावित के बाद सेhesia, हम तुलनीय दिल की दर समूहों के बीच एक वैध तुलना अनुमति देने के लिए प्राप्त कर रहे हैं कि पता लगाने के लिए अतिरिक्त कदम प्रस्तुत किया। इसके अलावा, इस संशोधित पीवी पाश तकनीक का उपयोग कर, एक अन्वेषक सीधे Bowditch 'प्रभाव का परीक्षण करने में सक्षम है। इन कारणों के लिए, हम विभिन्न दिल दरों पर इन विवो सिकुड़ना की सटीक मापन प्राप्त करने के लिए माउस में इस तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए क्या करते हैं।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Xlyzine 100 mg/ml | Ana Sed | 4821 | |
| Katamin 50 mg/ml | Ketalar | 310006 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals | 6003922 | |
| 4-0 silk thread | Surgical specialties | SP102 | |
| 6-0 silk thread | Surgical specialties | MBKF270 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Curve forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Vascular clamp | Fine Science Tools | 18555-03 | |
| Microscope | World precision instruments | PZM-3 | |
| Pressure catheter | Millar instruments | SPR-839 | |
| Pressure and volume system | Millar instruments | MPVS-300 | |
| PowerLab4/35 | AD instruments | N12128 | |
| LabchartPro 7 | AD instruments | ||
| Temperature controller | CWE | TC-1000 | |
| Stimulator | Grass | SD-5 | |
| Sterile glove | Micro-Touch | 1305018821 | |
| Hair remover lotion | Nair | ||
| Betadine surgical scrub | Veterinary | NDC 6761815401 | |
| Alcohol | Decon Laboratories | 2801 | |
| Bovie cautery | Bovie | AA29 | |
| 1 ml Syringe (26 G needle) | BD | 8017299 |
References
- Janssen, P. M.
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