Interactions Microscopie intravitale des leucocytes endothéliaux et plaquettes-leucocytes dans mésentériques veines chez les souris
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
Microscopie intravitale est une méthode qui peut être utilisée pour étudier des processus différents dans les différentes régions et des vaisseaux chez les animaux vivants. Dans ce protocole, nous décrivons la microscopie intravitale de veines de mesentery. Ceci peut être réalisé en un court laps de temps avec des résultats reproductibles montrant les interactions des leucocytes-endothélial in vivo. Nous décrivons un cadre inflammatoire après LPS défi de l'endothélium. Mais dans ce modèle on peut appliquer de nombreux types différents de conditions inflammatoires, comme bactérienne, chimique ou biologique et d'enquêter sur l'administration de médicaments et de leurs effets directs sur l'animal vivant et son impact sur le recrutement des leucocytes. Ce protocole a été appliqué avec succès à un certain nombre de traitements différents de souris et de leurs effets sur la réponse inflammatoire dans les vaisseaux. Ici, nous décrivons la visualisation des leucocytes et des plaquettes par marquage par fluorescence de la rhodamine 6G avec ceux-ci. En outre, toute imagerie spécifique peut être performed en utilisant des molécules cibles marquées par fluorescence.
Introduction
Le but de ce protocole est de décrire une technique simplifiée de microscopie intravitale de veines de mesentery chez les souris vivant pour l'observation directe des interactions leucocytes-endothélial et leuco-plaquettaire dans des conditions inflammatoires.
Microscopie intravitale a été développé pour étudier les interactions leucocytes-endothélial in vivo dans des conditions inflammatoires 1,2, ce qui est non pas anodine mais importante pour comprendre le recrutement des leucocytes inflammatoires et la fonction. La méthode que nous décrivons dans ce protocole a été développé sur la base de publications publiées antérieurement. Semblable à la visualisation plaquettes incorporation dans un thrombus croissante 3 et parallèlement à ce qui a été publié plus tôt 4, une veine mésentérique extériorisé est examiné par microscopie lumière transmise. Il existe divers autres modèles de la microscopie intra-vital tels que le muscle crémaster de rats 5 ou le foie des souris et des rats 6.
Microscopie intravitale du mésentère veine a été développée et appliquée dans les études précédentes par plusieurs groupes. Nous avons utilisé cette technique pour observer des différences dans le recrutement des leucocytes entre les souris de type sauvage et le tryptophane hydroxylase1 (TPH1) – / – souris, qui sont déficientes de la sérotonine non-neuronales et comparé les résultats à des souris dont la sérotonine plaquettaire a été pharmacologiquement appauvri par à long terme inhibiteur de la demande d'un recaptage de la sérotonine fluoxétine 7. Nous avons également examiné les interactions leucocytes-endothélial après le traitement par la fluoxétine aiguë 8.
Dans ce protocole, nous nous concentrons sur la microscopie intravitale de veines de mesentery, parce que ce modèle peut être réalisé rapidement, et permet des mesures valides de interactions leucocytes-endothélial et des plaquettes-leucocytes. Cela est beaucoup plus difficile et beaucoup de temps dans la microscopie intravitale d'autres organes, tels que les os, le foie, la peau, ou le muscle crémaster. Le model décrite ici est idéale pour l'évaluation reproductible inflammatoire de l'interaction cellule-cellule avec challengeing après un stimulus inflammatoire, comme l'injection intraperitoneale de lipopolysaccharide.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous décrivons ici la préparation et la performance de la microscopie intravitale de veines de mésentère des souris in vivo. Cette méthode nous donne l'occasion d'observer les interactions leucocytes-endothélial et des plaquettes-endothélial 11 directement dans l'organisme vivant.
Comme un début de réponse à l'inflammation de l'endothélium obtient activé et interagit avec les leucocytes et les plaquettes entraînant dans le laminage, l'…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
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