चूहे में Mesenterial रगों में की intravital माइक्रोस्कोपी ल्युकोसैट endothelial और प्लेटलेट ल्युकोसैट सहभागिता
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
Intravital माइक्रोस्कोपी रहने वाले जानवरों में अलग अलग क्षेत्रों में प्रक्रियाओं और जहाजों की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक विधि है। इस प्रोटोकॉल में, हम अन्त्रपेशी नसों के intravital माइक्रोस्कोपी का वर्णन है। इस vivo में ल्युकोसैट endothelial बातचीत दिखा प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के साथ समय की एक छोटी अवधि में प्रदर्शन किया जा सकता है। हम अन्तःचूचुक की एलपीएस चुनौती के बाद एक भड़काऊ सेटिंग का वर्णन है। लेकिन इस मॉडल में से एक है, बैक्टीरियल रासायनिक या जैविक, जैसे भड़काऊ शर्तों के कई अलग अलग प्रकार लागू करते हैं और दवाओं के प्रशासन और जीवित जानवरों पर उनके प्रत्यक्ष प्रभाव और ल्युकोसैट भर्ती पर इसके प्रभाव की जांच कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल चूहों और जहाजों में भड़काऊ प्रतिक्रिया पर उनके प्रभाव के विभिन्न उपचार के एक नंबर करने के लिए सफलतापूर्वक लागू किया गया है। इस के साथ साथ, हम fluorescently rhodamine 6G के साथ इन लेबल करके leukocytes और प्लेटलेट्स के दृश्य का वर्णन है। साथ ही, किसी भी विशिष्ट इमेजिंग पे किया जा सकता हैलक्षित fluorescently लेबल अणुओं का उपयोग कर rformed।
Introduction
इस प्रोटोकॉल के उद्देश्य भड़काऊ शर्तों के तहत ल्युकोसैट endothelial और ल्युकोसैट प्लेटलेट बातचीत के प्रत्यक्ष अवलोकन के लिए चूहों में रहने वाले अन्त्रपेशी नसों के intravital माइक्रोस्कोपी का एक सरल तकनीक का वर्णन करने के लिए है।
Intravital माइक्रोस्कोपी भड़काऊ ल्युकोसैट भर्ती और समारोह को समझने के लिए तुच्छ है, लेकिन महत्वपूर्ण नहीं है जो भड़काऊ शर्तों 1,2 के तहत vivo में ल्युकोसैट endothelial बातचीत का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया था। इस प्रोटोकॉल में हम विधि का वर्णन पहले प्रकाशित प्रकाशनों के आधार पर विकसित किया गया था। प्रकाशित किया गया है क्या करने के लिए एक से बढ़ थक्का 3 में और समानांतर में प्लेटलेट समावेश दृश्यमान करने के लिए इसी प्रकार पहले 4, एक exteriorized अन्त्रपेशी नस प्रेषित प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा जांच की है। ऐसे चूहों 5 या माउस के जिगर और चूहों 6 की cremaster मांसपेशियों के रूप में इंट्रा-महत्वपूर्ण माइक्रोस्कोपी के विभिन्न अन्य मॉडल हैं।
अन्त्रपेशी नस के intravital माइक्रोस्कोपी विकसित की है और कई समूहों द्वारा पिछले अध्ययनों में लागू किया गया है। / – – जिसका प्लेटलेट सेरोटोनिन औषधीय लंबी अवधि के द्वारा समाप्त हो गया था चूहों को निष्कर्ष गैर-न्यूरोनल सेरोटोनिन की कमी और तुलना कर रहे हैं चूहों, हम जंगली प्रकार चूहों और tryptophane hydroxylase1 (Tph1) के बीच ल्युकोसैट भर्ती में मतभेद निरीक्षण करने के लिए इस तकनीक का इस्तेमाल किया है आवेदन एक चयनात्मक serotonin reuptake अवरोध करनेवाला Fluoxetine 7। हम यह भी तीव्र Fluoxetine उपचार 8 के बाद ल्युकोसैट endothelial बातचीत की जांच की है।
इस मॉडल को जल्दी से प्रदर्शन किया, और ल्युकोसैट endothelial और प्लेटलेट ल्युकोसैट बातचीत के मान्य माप की अनुमति देता जा सकता है क्योंकि इस प्रोटोकॉल में हम, अन्त्रपेशी नसों के intravital माइक्रोस्कोपी पर ध्यान केंद्रित। यह अधिक चुनौतीपूर्ण और समय लेने वाली ऐसी हड्डी, जिगर, त्वचा, या cremaster मांसपेशियों के रूप में अन्य अंगों की intravital माइक्रोस्कोपी में है। साधनयहाँ वर्णित एल ऐसे lipopolysaccharide की intraperitoneal इंजेक्शन के रूप में एक भड़काऊ प्रोत्साहन, साथ यह challengeing के बाद भड़काऊ सेल सेल बातचीत की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मूल्यांकन के लिए आदर्श है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस के साथ साथ हम तैयार करने और इन विवो में चूहों के अन्त्रपेशी नसों के intravital माइक्रोस्कोपी के प्रदर्शन का वर्णन है। इस विधि हमें जीवित जीव में सीधे ल्युकोसैट endothelial और प्लेटलेट एन्दोथेलिअल बातचीत 11</sup…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
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