Coleta de Leite no Rato Usando Capilar Tubos e Estimativa da gordura do leite por conteúdo crematócrito
Summary
Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.
Abstract
Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.
Introduction
O leite é a única fonte de nutrição para mamíferos recém-nascidos, fornecendo energia e nutrientes para o crescimento e desenvolvimento infantil 1,2. Quando o leite é constituído principalmente por células, lípidos e proteína 1, que também contém uma pletora de compostos bioactivos que modulam o desenvolvimento vida precoce da descendência, incluindo enzimas, hidratos de carbono, hormonas, anticorpos, factores de crescimento, citocinas, exossomas, microvesículas, e pequenos RNAs tais como microARN 1,2. O papel fundamental do leite materno na criação da prole imunitário e saúde intestinal 3, juntamente com evidências de que crianças amamentadas são menos suscetíveis à doença 2, destaca a importância de identificar os constituintes do leite associados a processos de doenças no início da vida e os mecanismos moleculares envolvidos em suas ações. O rato é o desenvolvimento de um modelo popular para investigar o efeito de vários nutricional, fisiológico e intervenções químicas no iníciodesenvolvimento -life 4. A análise do leite do rato podem, portanto, proporcionar novos insights sobre a saúde materna e prole.
Avanços científicos atuais fornecem agora aumentar as oportunidades para investigações aprofundadas sobre os efeitos de constituintes do leite específicos na saúde e na doença. Por exemplo, a sequenciação de leite perfis bacterianas elucidou o seu papel na colonização intestinal precoce do intestino infantil 5, análise de espectrometria de massa de oligossacarídeos do leite forneceram uma visão sobre a alteração dos perfis de oligossacarídeos do leite via dieta materna 6 e profunda seqüenciamento de microRNA secretada em os glóbulos de gordura do leite materno destaca possíveis papéis na transcrição do gene, o metabolismo e a função imunológica 7.
Modelos de ratos representam um dos organismos modelo mais populares usados em estudos materno 8,9. Uma vantagem é seus períodos de gestação e aleitamento curtas, durando apenas approximatEly 21 dias cada; Por conseguinte, o tempo total a partir do início da gravidez até lactação representa um curto período de tempo em que os dados valiosos podem ser gerados. Quanto maior o tamanho de ratos em comparação com os ratinhos, no contexto de recolha do leite, pode proporcionar uma vantagem significativa no que diz respeito ao volume de leite e facilidade de recolha do leite; produção de leite no rato, por exemplo, parece ser dependente do peso corporal total com os ratos mais pesados que produzem mais leite 10.
Aqui, uma descrição geral para a coleta manual de leite de ratas lactantes é fornecido. Este protocolo requer um equipamento mínimo, é não-invasiva e de baixo custo, e podem ser usadas para recolher os volumes adequados de leite para análises adicionais a jusante. Em breve, a barragem é anestesiados com isoflurano, a descida do leite é estimulada pela oxitocina, e de leite são recolhidas em tubos capilares por meio de extracção manual do leite. Finalmente, como dois principais componentes de leite são proteínas e gordura, uma breve description de estimar o teor de gordura do leite por meio de medidas crematócrito 11 e quantificação da concentração total de proteínas usando um ensaio de proteína padrão é apresentada.
Protocol
Representative Results
Discussion
Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Isso funciona foi apoiada através de subsídios da Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (RGPIN 238382-2011) e Canadian Institutes of Health Research (MOP115076). Heather Paul foi apoiada por uma Ciências Naturais e do Conselho de Investigação do Canadá Engenharia de Bolsas de Pós-graduação e uma bolsa Alberta inova Health Solutions. Megan Hallam foi apoiado por uma bolsa de estudos em Ciências Naturais e Engenharia do Conselho de Pesquisa de Pós-Graduação, um Scholarship Frederick Banting e Charles Best Canadá graduação, e Prêmio de Crianças Alberta Hospital Research Institute Formação em Genética, Desenvolvimento Infantil e Saúde.
Materials
| Equipment – Milking | |||
| 1 ml syringes | BD-Canada | 309602 | |
| 25 G needles | BD-Canada | 305122 | |
| 18 G needles | BD-Canada | 305196 | |
| 50 ul Microdispenser Capillary Tubes | Fisher Scientific | 21-169D | |
| Oxytocin (20 USP Units/ml) | Bimeda-MTC | 1OXY015 | |
| PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml | Fresenius Kabi | M60302 | Used on the order of a veterinarian |
| Sterile Alcohol Prep Pad | Dukal | 853 | |
| Absorbent Bench Underpad | VWR | 82020-845 | |
| Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket | Cincinnati Sub-Zero | 274 | |
| Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer | Benson Medical Industries Inc. | Subject to individual laboratory needs | |
| Animal Masks | Benson Medical Industries Inc. | 50100/50102 | |
| Microcentrifuge Tubes | Axygen | MCT-060-C | |
| ChroMini Professional Trimmer | Wahl | – | |
| Equipment – Creamatocrit | |||
| StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated) | Fisher Scientific | 22-274-914 | |
| Critoseal Capillary Tube Sealant Tray | VWR | 470161-478 | |
| StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge | Beckman Coulter, Inc | X00-004999-001 |
References
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